CAJ | 학술논문

目的:通过检测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+ T淋巴细胞基因的miRNA,筛选与健康正常人差异表达的miRNA,鉴定对CD4+ T淋巴细胞具有调控作用miRNA,初步阐明miRNA在ACS发病机制中的作用.方法:选取入住我院的确诊为ACS患者20例为ACS组,以疑似ACS而冠脉造影正常的住院患者20例作为正常对照组;首先抽取新鲜外周静脉20 mL,使用密度梯度离心法分离出循环血中的单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),再使用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system,MACS)进一步分离出CD4+ T淋巴细胞;分离的CD4+ T淋巴细胞一部分用于检测纯度,另一部分用于芯片检测.CD4+T淋巴细胞纯度检测采用流式细胞术法(Flow cytometry,FCM)检测,分离所得的CD4+T淋巴细胞纯度,且采用台酚蓝检测活细胞数.CD4+ T淋巴细胞合格后再行下一步实验,即将另一部分CD4+T淋巴细胞采用Trizol法提取其细胞内总RNA后分两部分,一部分提取的RNA采用聚乙二醇(Poly ethylene glycol,PEG)方法分离纯化miRNA,另一部分用于real time PCR备用.用分光光度计测定RNA的浓度,使用凝胶电泳质检RNA的质量,合格后再使用miRNA基因芯片进行杂交,再用Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪检测CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA.另一部分RNA采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)对部分差异表达的miRNA进行验证.结果:使用MACS法分离出高纯度的人CD4+ T淋巴细胞.Trizol法能够提取其细胞内较完好的总RNA.miRNA芯片杂交检测及数据分析结果显示,ACS患者与正常对照者CD4+ T淋巴细胞中,在ACS患者中表达显著上调的有:miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中表达显著下调的有:miR-126和miR-211.实时定量结果显示,与对照组比较,ACS组miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因表达均显著上调,miR-126和miR-221的基因表达均显著下调(P＜0.05),与Affymetrix miRNA基因表达谱芯片检测结果一致.结论:筛选鉴定的ACS患者外周血CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA,可能参与了ACS的发生发展. 目的:通過檢測急性冠脈綜閤徵(acute coronary syndrome,ACS)患者外週血CD4+ T淋巴細胞基因的miRNA,篩選與健康正常人差異錶達的miRNA,鑒定對CD4+ T淋巴細胞具有調控作用miRNA,初步闡明miRNA在ACS髮病機製中的作用.方法:選取入住我院的確診為ACS患者20例為ACS組,以疑似ACS而冠脈造影正常的住院患者20例作為正常對照組;首先抽取新鮮外週靜脈20 mL,使用密度梯度離心法分離齣循環血中的單箇覈細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),再使用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system,MACS)進一步分離齣CD4+ T淋巴細胞;分離的CD4+ T淋巴細胞一部分用于檢測純度,另一部分用于芯片檢測.CD4+T淋巴細胞純度檢測採用流式細胞術法(Flow cytometry,FCM)檢測,分離所得的CD4+T淋巴細胞純度,且採用檯酚藍檢測活細胞數.CD4+ T淋巴細胞閤格後再行下一步實驗,即將另一部分CD4+T淋巴細胞採用Trizol法提取其細胞內總RNA後分兩部分,一部分提取的RNA採用聚乙二醇(Poly ethylene glycol,PEG)方法分離純化miRNA,另一部分用于real time PCR備用.用分光光度計測定RNA的濃度,使用凝膠電泳質檢RNA的質量,閤格後再使用miRNA基因芯片進行雜交,再用Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片掃描儀檢測CD4+T淋巴細胞差異錶達的miRNA.另一部分RNA採用實時熒光定量聚閤酶鏈式反應(Realtime PCR)對部分差異錶達的miRNA進行驗證.結果:使用MACS法分離齣高純度的人CD4+ T淋巴細胞.Trizol法能夠提取其細胞內較完好的總RNA.miRNA芯片雜交檢測及數據分析結果顯示,ACS患者與正常對照者CD4+ T淋巴細胞中,在ACS患者中錶達顯著上調的有:miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中錶達顯著下調的有:miR-126和miR-211.實時定量結果顯示,與對照組比較,ACS組miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因錶達均顯著上調,miR-126和miR-221的基因錶達均顯著下調(P＜0.05),與Affymetrix miRNA基因錶達譜芯片檢測結果一緻.結論:篩選鑒定的ACS患者外週血CD4+T淋巴細胞差異錶達的miRNA,可能參與瞭ACS的髮生髮展.
목적:통과검측급성관맥종합정(acute coronary syndrome,ACS)환자외주혈CD4+ T림파세포기인적miRNA,사선여건강정상인차이표체적miRNA,감정대CD4+ T림파세포구유조공작용miRNA,초보천명miRNA재ACS발병궤제중적작용.방법:선취입주아원적학진위ACS환자20례위ACS조,이의사ACS이관맥조영정상적주원환자20례작위정상대조조;수선추취신선외주정맥20 mL,사용밀도제도리심법분리출순배혈중적단개핵세포(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),재사용면역자주법(Magnetic cell sorting system,MACS)진일보분리출CD4+ T림파세포;분리적CD4+ T림파세포일부분용우검측순도,령일부분용우심편검측.CD4+T림파세포순도검측채용류식세포술법(Flow cytometry,FCM)검측,분리소득적CD4+T림파세포순도,차채용태분람검측활세포수.CD4+ T림파세포합격후재행하일보실험,즉장령일부분CD4+T림파세포채용Trizol법제취기세포내총RNA후분량부분,일부분제취적RNA채용취을이순(Poly ethylene glycol,PEG)방법분리순화miRNA,령일부분용우real time PCR비용.용분광광도계측정RNA적농도,사용응효전영질검RNA적질량,합격후재사용miRNA기인심편진행잡교,재용Affymetrix GeneChip Scanner 3000기인심편소묘의검측CD4+T림파세포차이표체적miRNA.령일부분RNA채용실시형광정량취합매련식반응(Realtime PCR)대부분차이표체적miRNA진행험증.결과:사용MACS법분리출고순도적인CD4+ T림파세포.Trizol법능구제취기세포내교완호적총RNA.miRNA심편잡교검측급수거분석결과현시,ACS환자여정상대조자CD4+ T림파세포중,재ACS환자중표체현저상조적유:miR-16,miR-145,miR-133b화miR-155,재ACS환자중표체현저하조적유:miR-126화miR-211.실시정량결과현시,여대조조비교,ACS조miR-16,miR-145,miR-133b화miR-155적기인표체균현저상조,miR-126화miR-221적기인표체균현저하조(P＜0.05),여Affymetrix miRNA기인표체보심편검측결과일치.결론:사선감정적ACS환자외주혈CD4+T림파세포차이표체적miRNA,가능삼여료ACS적발생발전.