华北农学报
華北農學報
화북농학보
Acta Agriculturae Boreali-Sinica
2015年
5期
77-82
,共6页
刘通%王恒%李运生%张运海
劉通%王恆%李運生%張運海
류통%왕항%리운생%장운해
体细胞克隆%山羊%成纤维细胞%生物学特性
體細胞剋隆%山羊%成纖維細胞%生物學特性
체세포극륭%산양%성섬유세포%생물학특성
Somatic cloning%Goat%Fibroblast cells%Biological characteristics
为研究克隆黄淮白山羊耳部皮肤成纤维细胞(cGSF)的体外培养及其生物学特性.通过组织块接种培养法和胰蛋白酶消化法均可以获得原代cGSF,但在接种培养24 h后,组织块法收获的细胞贴壁率和细胞量要明显高于胰酶消化法.就生长特征而言,cGSF的生长曲线也呈现典型“S”型,到达指数增长期、平台期的时间分别为第3,6天,早于普通黄淮白山羊的皮肤成纤维细胞(GSF),后者分别为第4,8天.cGSF原代(P0)、第2代(P2)、第8代(P8)细胞的染色体数目异常率均高于相同代数的GSF.在相同转染条件下,cGSF在转染pEGFP-N1后,再经G418筛选亦可形成克隆点,扩增获得阳性细胞系.总之,源自克隆山羊的体细胞体外生长、转基因后的生物学特征有别于普通动物分离得到的细胞系.因此,利用来自克隆动物的体细胞开展研究,选择分离培养、纯化、转基因方法时需要适当调整.
為研究剋隆黃淮白山羊耳部皮膚成纖維細胞(cGSF)的體外培養及其生物學特性.通過組織塊接種培養法和胰蛋白酶消化法均可以穫得原代cGSF,但在接種培養24 h後,組織塊法收穫的細胞貼壁率和細胞量要明顯高于胰酶消化法.就生長特徵而言,cGSF的生長麯線也呈現典型“S”型,到達指數增長期、平檯期的時間分彆為第3,6天,早于普通黃淮白山羊的皮膚成纖維細胞(GSF),後者分彆為第4,8天.cGSF原代(P0)、第2代(P2)、第8代(P8)細胞的染色體數目異常率均高于相同代數的GSF.在相同轉染條件下,cGSF在轉染pEGFP-N1後,再經G418篩選亦可形成剋隆點,擴增穫得暘性細胞繫.總之,源自剋隆山羊的體細胞體外生長、轉基因後的生物學特徵有彆于普通動物分離得到的細胞繫.因此,利用來自剋隆動物的體細胞開展研究,選擇分離培養、純化、轉基因方法時需要適噹調整.
위연구극륭황회백산양이부피부성섬유세포(cGSF)적체외배양급기생물학특성.통과조직괴접충배양법화이단백매소화법균가이획득원대cGSF,단재접충배양24 h후,조직괴법수획적세포첩벽솔화세포량요명현고우이매소화법.취생장특정이언,cGSF적생장곡선야정현전형“S”형,도체지수증장기、평태기적시간분별위제3,6천,조우보통황회백산양적피부성섬유세포(GSF),후자분별위제4,8천.cGSF원대(P0)、제2대(P2)、제8대(P8)세포적염색체수목이상솔균고우상동대수적GSF.재상동전염조건하,cGSF재전염pEGFP-N1후,재경G418사선역가형성극륭점,확증획득양성세포계.총지,원자극륭산양적체세포체외생장、전기인후적생물학특정유별우보통동물분리득도적세포계.인차,이용래자극륭동물적체세포개전연구,선택분리배양、순화、전기인방법시수요괄당조정.
