检验医学
檢驗醫學
검험의학
Laboratory Medicine
2015年
10期
1021-1026
,共6页
禹松林%方慧玲%张瑞苹%程歆琦%韩建华%苏薇%程倩%侯立安%姜小梅
禹鬆林%方慧玲%張瑞蘋%程歆琦%韓建華%囌薇%程倩%侯立安%薑小梅
우송림%방혜령%장서평%정흠기%한건화%소미%정천%후립안%강소매
25-羟基维生素D%3-epi 25-羟基维生素D3%液相色谱串联质谱法
25-羥基維生素D%3-epi 25-羥基維生素D3%液相色譜串聯質譜法
25-간기유생소D%3-epi 25-간기유생소D3%액상색보천련질보법
25-hydroxyvitamin D%3-epi 25-hydroxyvitamin D3%Liquid chromatography tandem mass spectrometry
目的 建立可同时区分3-epi 25-羟基维生素D3[3-epi 25 (OH) D3]、25-羟基维生素D3[25(OH) D3]和25-羟基维生素D2[25(OH) D2]的改良超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS).方法 采用甲醇、硫酸锌沉淀蛋白,以稳定同位素为内标,正己烷提取,色谱采用甲醇和水以一定比例进行梯度洗脱,质谱采用正离子条件下多离子反应监测模式,3-epi 25 (OH) D3和25 (OH) D3的定量离子通道质荷比(mass to charge,m/z)均为413.3→395.3,25 (OH) D2的m/z为401.4→383.4;同位素内标25 (OH) D2-d3和25(OH) D3-d3的m/z分别为416.3→398.3和404.4→386.4.25 (OH) D3和25 (OH) D2分别以各自的标准品和同位素内标制作标准曲线;3-epi 25(OH) D3采用25 (OH) D3的标准曲线和内标.评价方法的线性、精密度和准确度等,同时用本法和常规UPLC-MS/MS测定307例临床样本,考察方法的一致性,判别3-epi 25(OH) D3对常规UPLC-MS/MS测定结果的影响.结果 本法可在13 min内将3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3和25 (OH) D2完全区分开,3种物质互不干扰,线性相关系数(r) ＞0.999,25 (OH) D3总变异参数(CV)的均值(范围)为2.82％(2.45％～3.21％),批内CV为1.82％ (1.76％ ～ 1.91％);25 (OH) D2总CV的均值(范围)为4.34％ (2.88％ ～ 7.01％),批内CV为2.62％(1.91％～3.66％).25 (OH) D2、25 (OH) D3和3-epi 25 (OH) D3的准确度分别104.5％ ～ 106.8％、98.9％ ～106.9％、108.0％ ～ 109.9％.随机测定307例临床样本,结果显示样本3-epi 25(OH) D3浓度均在3.0 ng/mL以下,本法和常规UPLC-MS/MS分析25-羟基维生素D[25(OH) D]的结果分别为15.53±8.58和(15.98±9.08)ng/mL,偏差为-0.46 ng/mL,百分偏差为-2.44％,2种方法的结果差异无统计学意义(=0.631,P=0.53),R2=0.978.用本法测定得到的维生素D不足、缺乏和充足率分别为76.9％、14.3％、8.8％,常规法的结果分别为75.6％、15.3％、9.1％,2种方法对临床判定的一致率达94.1％,3-epi 25(OH) D3对临床常规UPLC-MS/MS基本无影响.结论 成功建立了可同时区分3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3和25(OH)D2的改良UPLC-MS/MS,该法准确、特异,为评价临床常规UPLC-MS/MS及自动化免疫分析25(OH)D的方法提供了方法学基础.
目的 建立可同時區分3-epi 25-羥基維生素D3[3-epi 25 (OH) D3]、25-羥基維生素D3[25(OH) D3]和25-羥基維生素D2[25(OH) D2]的改良超高效液相色譜串聯質譜法(UPLC-MS/MS).方法 採用甲醇、硫痠鋅沉澱蛋白,以穩定同位素為內標,正己烷提取,色譜採用甲醇和水以一定比例進行梯度洗脫,質譜採用正離子條件下多離子反應鑑測模式,3-epi 25 (OH) D3和25 (OH) D3的定量離子通道質荷比(mass to charge,m/z)均為413.3→395.3,25 (OH) D2的m/z為401.4→383.4;同位素內標25 (OH) D2-d3和25(OH) D3-d3的m/z分彆為416.3→398.3和404.4→386.4.25 (OH) D3和25 (OH) D2分彆以各自的標準品和同位素內標製作標準麯線;3-epi 25(OH) D3採用25 (OH) D3的標準麯線和內標.評價方法的線性、精密度和準確度等,同時用本法和常規UPLC-MS/MS測定307例臨床樣本,攷察方法的一緻性,判彆3-epi 25(OH) D3對常規UPLC-MS/MS測定結果的影響.結果 本法可在13 min內將3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3和25 (OH) D2完全區分開,3種物質互不榦擾,線性相關繫數(r) ＞0.999,25 (OH) D3總變異參數(CV)的均值(範圍)為2.82％(2.45％～3.21％),批內CV為1.82％ (1.76％ ～ 1.91％);25 (OH) D2總CV的均值(範圍)為4.34％ (2.88％ ～ 7.01％),批內CV為2.62％(1.91％～3.66％).25 (OH) D2、25 (OH) D3和3-epi 25 (OH) D3的準確度分彆104.5％ ～ 106.8％、98.9％ ～106.9％、108.0％ ～ 109.9％.隨機測定307例臨床樣本,結果顯示樣本3-epi 25(OH) D3濃度均在3.0 ng/mL以下,本法和常規UPLC-MS/MS分析25-羥基維生素D[25(OH) D]的結果分彆為15.53±8.58和(15.98±9.08)ng/mL,偏差為-0.46 ng/mL,百分偏差為-2.44％,2種方法的結果差異無統計學意義(=0.631,P=0.53),R2=0.978.用本法測定得到的維生素D不足、缺乏和充足率分彆為76.9％、14.3％、8.8％,常規法的結果分彆為75.6％、15.3％、9.1％,2種方法對臨床判定的一緻率達94.1％,3-epi 25(OH) D3對臨床常規UPLC-MS/MS基本無影響.結論 成功建立瞭可同時區分3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3和25(OH)D2的改良UPLC-MS/MS,該法準確、特異,為評價臨床常規UPLC-MS/MS及自動化免疫分析25(OH)D的方法提供瞭方法學基礎.
목적 건립가동시구분3-epi 25-간기유생소D3[3-epi 25 (OH) D3]、25-간기유생소D3[25(OH) D3]화25-간기유생소D2[25(OH) D2]적개량초고효액상색보천련질보법(UPLC-MS/MS).방법 채용갑순、류산자침정단백,이은정동위소위내표,정기완제취,색보채용갑순화수이일정비례진행제도세탈,질보채용정리자조건하다리자반응감측모식,3-epi 25 (OH) D3화25 (OH) D3적정량리자통도질하비(mass to charge,m/z)균위413.3→395.3,25 (OH) D2적m/z위401.4→383.4;동위소내표25 (OH) D2-d3화25(OH) D3-d3적m/z분별위416.3→398.3화404.4→386.4.25 (OH) D3화25 (OH) D2분별이각자적표준품화동위소내표제작표준곡선;3-epi 25(OH) D3채용25 (OH) D3적표준곡선화내표.평개방법적선성、정밀도화준학도등,동시용본법화상규UPLC-MS/MS측정307례림상양본,고찰방법적일치성,판별3-epi 25(OH) D3대상규UPLC-MS/MS측정결과적영향.결과 본법가재13 min내장3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3화25 (OH) D2완전구분개,3충물질호불간우,선성상관계수(r) ＞0.999,25 (OH) D3총변이삼수(CV)적균치(범위)위2.82％(2.45％～3.21％),비내CV위1.82％ (1.76％ ～ 1.91％);25 (OH) D2총CV적균치(범위)위4.34％ (2.88％ ～ 7.01％),비내CV위2.62％(1.91％～3.66％).25 (OH) D2、25 (OH) D3화3-epi 25 (OH) D3적준학도분별104.5％ ～ 106.8％、98.9％ ～106.9％、108.0％ ～ 109.9％.수궤측정307례림상양본,결과현시양본3-epi 25(OH) D3농도균재3.0 ng/mL이하,본법화상규UPLC-MS/MS분석25-간기유생소D[25(OH) D]적결과분별위15.53±8.58화(15.98±9.08)ng/mL,편차위-0.46 ng/mL,백분편차위-2.44％,2충방법적결과차이무통계학의의(=0.631,P=0.53),R2=0.978.용본법측정득도적유생소D불족、결핍화충족솔분별위76.9％、14.3％、8.8％,상규법적결과분별위75.6％、15.3％、9.1％,2충방법대림상판정적일치솔체94.1％,3-epi 25(OH) D3대림상상규UPLC-MS/MS기본무영향.결론 성공건립료가동시구분3-epi 25(OH) D3、25 (OH) D3화25(OH)D2적개량UPLC-MS/MS,해법준학、특이,위평개림상상규UPLC-MS/MS급자동화면역분석25(OH)D적방법제공료방법학기출.
