分析测试学报
分析測試學報
분석측시학보
Journal of Instrumental Analysis
2015年
10期
1173-1178
,共6页
徐军%吴萌%龚庆伟%封启媛%吴岭%陈小锋
徐軍%吳萌%龔慶偉%封啟媛%吳嶺%陳小鋒
서군%오맹%공경위%봉계원%오령%진소봉
重组人胰岛素注射液%B3和B3iso脱氨人胰岛素%反相高效液相色谱%液相色谱-串联质谱
重組人胰島素註射液%B3和B3iso脫氨人胰島素%反相高效液相色譜%液相色譜-串聯質譜
중조인이도소주사액%B3화B3iso탈안인이도소%반상고효액상색보%액상색보-천련질보
recombinant human insulin%B3 and B3iso desamido human insulin%RP-HPLC%LC-MS/MS
建立了有效分离重组人胰岛素注射液中B3和B3iso脱氨人胰岛素的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(HPLC-MS/MS)对其进行氨基酸序列的鉴定.在《中国药典》2010版重组人胰岛素注射液有关物质检查分析方法的基础上,优化流动相pH值,以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH 3.6)-乙腈(90∶10)作为A相,乙腈-水(50∶50)为B相,梯度洗脱,分别收集杂质峰1和杂质峰2,脱盐浓缩后,用丝氨酸蛋白酶(V8酶)酶切,取部分酶切溶液经三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)还原,分别得到还原和非还原肽段溶液,利用LC-MS/MS鉴定氨基酸序列,未知杂质分别为重组人胰岛素B3位发生脱氨和异构化的产物,即B3和B3iso脱氨人胰岛素.将优化后的方法与《中国药典》方法对市售重组人胰岛素注射液进行有关物质的对比分析,已上市厂家的重组人胰岛素注射液均有不同程度的B3和B3iso脱氨人胰岛素存在.该方法不影响重组人胰岛素其它有关物质的检测,可用于监控人胰岛素注射液产品储存过程中脱氨类杂质的增长趋势.
建立瞭有效分離重組人胰島素註射液中B3和B3iso脫氨人胰島素的反相高效液相色譜(RP-HPLC)法,併採用高效液相色譜-四極桿-飛行時間質譜聯用技術(HPLC-MS/MS)對其進行氨基痠序列的鑒定.在《中國藥典》2010版重組人胰島素註射液有關物質檢查分析方法的基礎上,優化流動相pH值,以0.2mol/L硫痠鹽緩遲液(pH 3.6)-乙腈(90∶10)作為A相,乙腈-水(50∶50)為B相,梯度洗脫,分彆收集雜質峰1和雜質峰2,脫鹽濃縮後,用絲氨痠蛋白酶(V8酶)酶切,取部分酶切溶液經三(2-羧乙基)膦鹽痠鹽(TCEP)還原,分彆得到還原和非還原肽段溶液,利用LC-MS/MS鑒定氨基痠序列,未知雜質分彆為重組人胰島素B3位髮生脫氨和異構化的產物,即B3和B3iso脫氨人胰島素.將優化後的方法與《中國藥典》方法對市售重組人胰島素註射液進行有關物質的對比分析,已上市廠傢的重組人胰島素註射液均有不同程度的B3和B3iso脫氨人胰島素存在.該方法不影響重組人胰島素其它有關物質的檢測,可用于鑑控人胰島素註射液產品儲存過程中脫氨類雜質的增長趨勢.
건립료유효분리중조인이도소주사액중B3화B3iso탈안인이도소적반상고효액상색보(RP-HPLC)법,병채용고효액상색보-사겁간-비행시간질보련용기술(HPLC-MS/MS)대기진행안기산서렬적감정.재《중국약전》2010판중조인이도소주사액유관물질검사분석방법적기출상,우화류동상pH치,이0.2mol/L류산염완충액(pH 3.6)-을정(90∶10)작위A상,을정-수(50∶50)위B상,제도세탈,분별수집잡질봉1화잡질봉2,탈염농축후,용사안산단백매(V8매)매절,취부분매절용액경삼(2-최을기)련염산염(TCEP)환원,분별득도환원화비환원태단용액,이용LC-MS/MS감정안기산서렬,미지잡질분별위중조인이도소B3위발생탈안화이구화적산물,즉B3화B3iso탈안인이도소.장우화후적방법여《중국약전》방법대시수중조인이도소주사액진행유관물질적대비분석,이상시엄가적중조인이도소주사액균유불동정도적B3화B3iso탈안인이도소존재.해방법불영향중조인이도소기타유관물질적검측,가용우감공인이도소주사액산품저존과정중탈안류잡질적증장추세.
