华北农学报
華北農學報
화북농학보
Acta Agriculturae Boreali-Sinica
2015年
5期
57-64
,共8页
王江英%范正琪%殷恒福%吴斌%刘伟鑫%李纪元
王江英%範正琪%慇恆福%吳斌%劉偉鑫%李紀元
왕강영%범정기%은항복%오빈%류위흠%리기원
杜鹃红山茶%基因克隆%虫害%表达分析%转基因烟草
杜鵑紅山茶%基因剋隆%蟲害%錶達分析%轉基因煙草
두견홍산다%기인극륭%충해%표체분석%전기인연초
Camellia azalea%Gene clone%Insect tolerance%Expression analysis%Transgenic tobacco
绝大多数观赏山茶花属于设施栽培植物,因环境湿热易造成病虫害出现,导致观赏价值降低,影响种植效益.为了提高抗虫性,根据山茶同源序列设计特异性引物,利用同源克隆和3',5'-RACE技术,从杜鹃红山茶嫩叶组织中克隆出半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cysteine proteinase inhibitor,CPI)基因,命名为CaCPI,基因全长579 bp,开放阅读框306 bp,编码101个氨基酸,分子量为11.078 kDa,等电点pI =6.72.利用实时荧光定量PCR方法对杜鹃红山茶根、茎、叶中该基因的表达特性进行分析,结果表明,CaCPI基因在叶中的表达量较高,其次为茎,在根中表达量较低,比较显示叶的表达量分别约为茎的1.53倍,根的1.61倍.转基因烟草分析表明,过量表达CaCPI基因后,转基因烟草中目的基因表达量提高了55.84 ～ 174.83倍,并且转基因植株抗蚜虫能力获得提高,接虫5d后植株上的蚜虫绝大多数死亡,累积死亡率约为90.75％,高达野生型的5.14倍.
絕大多數觀賞山茶花屬于設施栽培植物,因環境濕熱易造成病蟲害齣現,導緻觀賞價值降低,影響種植效益.為瞭提高抗蟲性,根據山茶同源序列設計特異性引物,利用同源剋隆和3',5'-RACE技術,從杜鵑紅山茶嫩葉組織中剋隆齣半胱氨痠蛋白酶抑製劑(Cysteine proteinase inhibitor,CPI)基因,命名為CaCPI,基因全長579 bp,開放閱讀框306 bp,編碼101箇氨基痠,分子量為11.078 kDa,等電點pI =6.72.利用實時熒光定量PCR方法對杜鵑紅山茶根、莖、葉中該基因的錶達特性進行分析,結果錶明,CaCPI基因在葉中的錶達量較高,其次為莖,在根中錶達量較低,比較顯示葉的錶達量分彆約為莖的1.53倍,根的1.61倍.轉基因煙草分析錶明,過量錶達CaCPI基因後,轉基因煙草中目的基因錶達量提高瞭55.84 ～ 174.83倍,併且轉基因植株抗蚜蟲能力穫得提高,接蟲5d後植株上的蚜蟲絕大多數死亡,纍積死亡率約為90.75％,高達野生型的5.14倍.
절대다수관상산다화속우설시재배식물,인배경습열역조성병충해출현,도치관상개치강저,영향충식효익.위료제고항충성,근거산다동원서렬설계특이성인물,이용동원극륭화3',5'-RACE기술,종두견홍산다눈협조직중극륭출반광안산단백매억제제(Cysteine proteinase inhibitor,CPI)기인,명명위CaCPI,기인전장579 bp,개방열독광306 bp,편마101개안기산,분자량위11.078 kDa,등전점pI =6.72.이용실시형광정량PCR방법대두견홍산다근、경、협중해기인적표체특성진행분석,결과표명,CaCPI기인재협중적표체량교고,기차위경,재근중표체량교저,비교현시협적표체량분별약위경적1.53배,근적1.61배.전기인연초분석표명,과량표체CaCPI기인후,전기인연초중목적기인표체량제고료55.84 ～ 174.83배,병차전기인식주항아충능력획득제고,접충5d후식주상적아충절대다수사망,루적사망솔약위90.75％,고체야생형적5.14배.
