南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
Journal of Southern Medical University
2015年
10期
1451-1456
,共6页
韩白玉%崔瀚之%燕翔%黄鹏%黄华龙%范忠义%窦京涛
韓白玉%崔瀚之%燕翔%黃鵬%黃華龍%範忠義%竇京濤
한백옥%최한지%연상%황붕%황화룡%범충의%두경도
bcl-6基因%3'UTR区%荧光素酶报告基因%细胞周期
bcl-6基因%3'UTR區%熒光素酶報告基因%細胞週期
bcl-6기인%3'UTR구%형광소매보고기인%세포주기
bcl-6 gene%3'UTR%luciferase reporter gene%cell cycle
目的 通过构建bcl-6基因野生型、突变体3'UTR区及其编码序列(CDS),观察miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用及bcl-6表达载体回复miR-127抑制细胞周期和细胞生长的功能.方法 利用PCR方法扩增bcl-6基因3'UTR区序列及其CDS,分别构建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag载体上,在bcl-6基因3'UTR质粒基础上应用重组PCR方法构建miR-127结合位点突变的突变体报告基因质粒,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用,在肝癌细胞HepG2中检测过表达及敲低miR-127引起bcl-6基因表达抑制后细胞周期和细胞生长的改变,同时应用表达载体回复bcl-6蛋白水平,检测bcl-6在miR-127调控细胞周期和细胞生长中的必要性.结果 构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确,bcl-6 YUTR野生型和突变体报告质粒与miR-127共转293T细胞和HepG2细胞后荧光素酶报告基因检测显示miR-127明显降低野生型报告质粒的活性,但对突变体活性没有影响,miR-127可引起HepG2细胞G2/M期阻滞并抑制细胞生长,bcl-6可以逆转miR-127对细胞周期和细胞生长的影响.结论 成功构建bcl-6基因3'UTR区野生型、突变体报告质粒和bcl-6基因的表达载体,荧光素酶报告基因和回复实验证实均具有生物学功能.
目的 通過構建bcl-6基因野生型、突變體3'UTR區及其編碼序列(CDS),觀察miR-127對bcl-6的直接靶嚮調控作用及bcl-6錶達載體迴複miR-127抑製細胞週期和細胞生長的功能.方法 利用PCR方法擴增bcl-6基因3'UTR區序列及其CDS,分彆構建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag載體上,在bcl-6基因3'UTR質粒基礎上應用重組PCR方法構建miR-127結閤位點突變的突變體報告基因質粒,應用熒光素酶報告基因繫統檢測miR-127對bcl-6的直接靶嚮調控作用,在肝癌細胞HepG2中檢測過錶達及敲低miR-127引起bcl-6基因錶達抑製後細胞週期和細胞生長的改變,同時應用錶達載體迴複bcl-6蛋白水平,檢測bcl-6在miR-127調控細胞週期和細胞生長中的必要性.結果 構建的重組質粒經酶切鑒定和測序證實構建正確,bcl-6 YUTR野生型和突變體報告質粒與miR-127共轉293T細胞和HepG2細胞後熒光素酶報告基因檢測顯示miR-127明顯降低野生型報告質粒的活性,但對突變體活性沒有影響,miR-127可引起HepG2細胞G2/M期阻滯併抑製細胞生長,bcl-6可以逆轉miR-127對細胞週期和細胞生長的影響.結論 成功構建bcl-6基因3'UTR區野生型、突變體報告質粒和bcl-6基因的錶達載體,熒光素酶報告基因和迴複實驗證實均具有生物學功能.
목적 통과구건bcl-6기인야생형、돌변체3'UTR구급기편마서렬(CDS),관찰miR-127대bcl-6적직접파향조공작용급bcl-6표체재체회복miR-127억제세포주기화세포생장적공능.방법 이용PCR방법확증bcl-6기인3'UTR구서렬급기CDS,분별구건재pcDNA3.0-Luc화pcDNA3.0-Flag재체상,재bcl-6기인3'UTR질립기출상응용중조PCR방법구건miR-127결합위점돌변적돌변체보고기인질립,응용형광소매보고기인계통검측miR-127대bcl-6적직접파향조공작용,재간암세포HepG2중검측과표체급고저miR-127인기bcl-6기인표체억제후세포주기화세포생장적개변,동시응용표체재체회복bcl-6단백수평,검측bcl-6재miR-127조공세포주기화세포생장중적필요성.결과 구건적중조질립경매절감정화측서증실구건정학,bcl-6 YUTR야생형화돌변체보고질립여miR-127공전293T세포화HepG2세포후형광소매보고기인검측현시miR-127명현강저야생형보고질립적활성,단대돌변체활성몰유영향,miR-127가인기HepG2세포G2/M기조체병억제세포생장,bcl-6가이역전miR-127대세포주기화세포생장적영향.결론 성공구건bcl-6기인3'UTR구야생형、돌변체보고질립화bcl-6기인적표체재체,형광소매보고기인화회복실험증실균구유생물학공능.
