现代医院
現代醫院
현대의원
Modern Hospital
2015年
11期
26-28,32
,共4页
何伟%秦如斋%张小冬%刘文丹%潘春华
何偉%秦如齋%張小鼕%劉文丹%潘春華
하위%진여재%장소동%류문단%반춘화
小鼠CCR7受体%RNA干扰%腺病毒载体
小鼠CCR7受體%RNA榦擾%腺病毒載體
소서CCR7수체%RNA간우%선병독재체
目的 构建小鼠CC趋化因子受体7(CCR7)基因特异性短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,研究其对CCR7分子表达的影响.方法 根据小鼠CCR7 mRNA序列,设计三个shRNA序列,并插入表达载体pHBAd-U6-GFP中,经基因测序鉴定.然后用获得的重组CCR7 shRNA表达载体转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,测定病毒滴度TCID50,并用重组腺病毒感染小鼠MEF细胞,观察细胞绿色荧光强度,Western Blotting检测CCR7蛋白的表达.结果 基因测序证明:获得的三个shRNA载体序列与原设计序列完全相符,扩增后的病毒上清滴度分别为:1.0×1010、1.6×1010和1.25×1010 PFU/mL.Ad CCR7 shR-NA1腺病毒可明显下调小鼠MEF细胞CCR7蛋白表达.结论 成功构建了小鼠CCR7特异性shRNA腺病毒表达载体,并获得了高滴度病毒上清,为以后研究肿瘤淋巴转移的分子机制和信号通路打下了坚实的基础.
目的 構建小鼠CC趨化因子受體7(CCR7)基因特異性短髮卡RNA(shRNA)真覈錶達載體,研究其對CCR7分子錶達的影響.方法 根據小鼠CCR7 mRNA序列,設計三箇shRNA序列,併插入錶達載體pHBAd-U6-GFP中,經基因測序鑒定.然後用穫得的重組CCR7 shRNA錶達載體轉染人胚腎細胞HEK293,進行病毒包裝、齣毒和擴增,測定病毒滴度TCID50,併用重組腺病毒感染小鼠MEF細胞,觀察細胞綠色熒光彊度,Western Blotting檢測CCR7蛋白的錶達.結果 基因測序證明:穫得的三箇shRNA載體序列與原設計序列完全相符,擴增後的病毒上清滴度分彆為:1.0×1010、1.6×1010和1.25×1010 PFU/mL.Ad CCR7 shR-NA1腺病毒可明顯下調小鼠MEF細胞CCR7蛋白錶達.結論 成功構建瞭小鼠CCR7特異性shRNA腺病毒錶達載體,併穫得瞭高滴度病毒上清,為以後研究腫瘤淋巴轉移的分子機製和信號通路打下瞭堅實的基礎.
목적 구건소서CC추화인자수체7(CCR7)기인특이성단발잡RNA(shRNA)진핵표체재체,연구기대CCR7분자표체적영향.방법 근거소서CCR7 mRNA서렬,설계삼개shRNA서렬,병삽입표체재체pHBAd-U6-GFP중,경기인측서감정.연후용획득적중조CCR7 shRNA표체재체전염인배신세포HEK293,진행병독포장、출독화확증,측정병독적도TCID50,병용중조선병독감염소서MEF세포,관찰세포록색형광강도,Western Blotting검측CCR7단백적표체.결과 기인측서증명:획득적삼개shRNA재체서렬여원설계서렬완전상부,확증후적병독상청적도분별위:1.0×1010、1.6×1010화1.25×1010 PFU/mL.Ad CCR7 shR-NA1선병독가명현하조소서MEF세포CCR7단백표체.결론 성공구건료소서CCR7특이성shRNA선병독표체재체,병획득료고적도병독상청,위이후연구종류림파전이적분자궤제화신호통로타하료견실적기출.
