新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
Xinjiang Agricultural Sciences
2015年
8期
1510-1516
,共7页
黄世平%戴玲玲%宋策%曾幼玲
黃世平%戴玲玲%宋策%曾幼玲
황세평%대령령%송책%증유령
盐穗木%醛脱氢酶ALDH7A1%原核表达
鹽穗木%醛脫氫酶ALDH7A1%原覈錶達
염수목%철탈경매ALDH7A1%원핵표체
Halostachys caspica%aldehyde dehydrogenases (ALDH7A1)%prokaryotic expression
[目的]为构建盐穗木盐响应基因HcALDH7A1的原核表达载体并进行外源基因的诱导表达和优化.[方法]以实验室已构建好的p mD18-T Simple-HcALDH7A1/DH5α(Pst Ⅰ,SacⅠ)重组载体中盐穗木醛脱氢酶基因(HcALDH7A1)为模板,设计带有酶切位点(EcoRⅠ,XhoⅠ)的引物通过PCR扩增亚克隆到p mD18-TSimple vector中,测序鉴定正确后,通过EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,构建重组的原核表达载体pET28a-HcALDH7 A1.将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白表达,并对其表达体系进行优化.[结果]成功构建盐穗木醛脱氢酶基因HcALDH7A1的原核表达载体,诱导HcALDH7A1外源基因表达蛋白优化的最佳条件为IPTG终浓度为0.6 mmol/L,30℃诱导时间为4h.融合蛋白分子量大小为61 kD.[结论]成功在大肠杆菌体内诱导表达盐穗木醛脱氢酶HcALDH7A1基因,并明确目的蛋白的最佳表达条件.为后续在原核表达系统大肠杆菌细胞中探索盐穗木HcALDH7A1的生物和非生物胁迫的功能奠定了基础.
[目的]為構建鹽穗木鹽響應基因HcALDH7A1的原覈錶達載體併進行外源基因的誘導錶達和優化.[方法]以實驗室已構建好的p mD18-T Simple-HcALDH7A1/DH5α(Pst Ⅰ,SacⅠ)重組載體中鹽穗木醛脫氫酶基因(HcALDH7A1)為模闆,設計帶有酶切位點(EcoRⅠ,XhoⅠ)的引物通過PCR擴增亞剋隆到p mD18-TSimple vector中,測序鑒定正確後,通過EcoRⅠ和Xho Ⅰ雙酶切,構建重組的原覈錶達載體pET28a-HcALDH7 A1.將鑒定正確的重組質粒轉化到大腸桿菌Transetta(DE3)中,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,SDS-PAGE檢測目的蛋白錶達,併對其錶達體繫進行優化.[結果]成功構建鹽穗木醛脫氫酶基因HcALDH7A1的原覈錶達載體,誘導HcALDH7A1外源基因錶達蛋白優化的最佳條件為IPTG終濃度為0.6 mmol/L,30℃誘導時間為4h.融閤蛋白分子量大小為61 kD.[結論]成功在大腸桿菌體內誘導錶達鹽穗木醛脫氫酶HcALDH7A1基因,併明確目的蛋白的最佳錶達條件.為後續在原覈錶達繫統大腸桿菌細胞中探索鹽穗木HcALDH7A1的生物和非生物脅迫的功能奠定瞭基礎.
[목적]위구건염수목염향응기인HcALDH7A1적원핵표체재체병진행외원기인적유도표체화우화.[방법]이실험실이구건호적p mD18-T Simple-HcALDH7A1/DH5α(Pst Ⅰ,SacⅠ)중조재체중염수목철탈경매기인(HcALDH7A1)위모판,설계대유매절위점(EcoRⅠ,XhoⅠ)적인물통과PCR확증아극륭도p mD18-TSimple vector중,측서감정정학후,통과EcoRⅠ화Xho Ⅰ쌍매절,구건중조적원핵표체재체pET28a-HcALDH7 A1.장감정정학적중조질립전화도대장간균Transetta(DE3)중,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,SDS-PAGE검측목적단백표체,병대기표체체계진행우화.[결과]성공구건염수목철탈경매기인HcALDH7A1적원핵표체재체,유도HcALDH7A1외원기인표체단백우화적최가조건위IPTG종농도위0.6 mmol/L,30℃유도시간위4h.융합단백분자량대소위61 kD.[결론]성공재대장간균체내유도표체염수목철탈경매HcALDH7A1기인,병명학목적단백적최가표체조건.위후속재원핵표체계통대장간균세포중탐색염수목HcALDH7A1적생물화비생물협박적공능전정료기출.
