山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
Journal of Shanxi Medical University
2015年
11期
1074-1078
,共5页
金艳燕%邓君%金良韵%肖忠新%徐志卿%张进禄%赵君朋%薛冰
金豔燕%鄧君%金良韻%肖忠新%徐誌卿%張進祿%趙君朋%薛冰
금염연%산군%금량운%초충신%서지경%장진록%조군붕%설빙
质粒构建%荧光共振能量转移%转移效率%荧光融合蛋白
質粒構建%熒光共振能量轉移%轉移效率%熒光融閤蛋白
질립구건%형광공진능량전이%전이효솔%형광융합단백
plasmid construction%fluorescence resonance energy transfer%transfer efficiency%CFP-YFP
目的 构建青色荧光蛋白(CFP)基因和黄色荧光蛋白(YFP)基因相连接的真核表达载体pYFP-CFP,并检测融合蛋白CFP-YFP的FRET转移效率,为FRET技术提供阳性参照物. 方法 利用基因重组法,以带有CFP基因序列的质粒(pCFP)为模板,扩增CFP基因并插入黄色荧光蛋白载体(pYFP)的多克隆位点中,构建真核表达质粒pYFP-CFP.经细胞转染后,使其表达CFP和YFP相连的融合蛋白.在激光共聚焦显微镜下采集FRET信号图和FRET转移效率(EFRET)的计算,并比较和分析表达CFP-YFP的阳性细胞与CFP和YFP共表达的阴性细胞. 结果 真核表达质粒pYFP-CFP构建成功,并在细胞质中表达,这与pCFP和pYFP共转染的细胞中荧光蛋白的分布略有不同,后者在细胞胞质和细胞核中均有表达.统计结果显示表达融合蛋白的阳性组EFRET明显高于共表达的阴性组,差异有统计学意义. 结论 融合荧光蛋白分子的青色和黄色蛋白之间具有10个氨基酸残基相连,符合FRET现象发生的条件,能够采集到很强的FRET信号,可作为FRET研究的稳定阳性实验参照.
目的 構建青色熒光蛋白(CFP)基因和黃色熒光蛋白(YFP)基因相連接的真覈錶達載體pYFP-CFP,併檢測融閤蛋白CFP-YFP的FRET轉移效率,為FRET技術提供暘性參照物. 方法 利用基因重組法,以帶有CFP基因序列的質粒(pCFP)為模闆,擴增CFP基因併插入黃色熒光蛋白載體(pYFP)的多剋隆位點中,構建真覈錶達質粒pYFP-CFP.經細胞轉染後,使其錶達CFP和YFP相連的融閤蛋白.在激光共聚焦顯微鏡下採集FRET信號圖和FRET轉移效率(EFRET)的計算,併比較和分析錶達CFP-YFP的暘性細胞與CFP和YFP共錶達的陰性細胞. 結果 真覈錶達質粒pYFP-CFP構建成功,併在細胞質中錶達,這與pCFP和pYFP共轉染的細胞中熒光蛋白的分佈略有不同,後者在細胞胞質和細胞覈中均有錶達.統計結果顯示錶達融閤蛋白的暘性組EFRET明顯高于共錶達的陰性組,差異有統計學意義. 結論 融閤熒光蛋白分子的青色和黃色蛋白之間具有10箇氨基痠殘基相連,符閤FRET現象髮生的條件,能夠採集到很彊的FRET信號,可作為FRET研究的穩定暘性實驗參照.
목적 구건청색형광단백(CFP)기인화황색형광단백(YFP)기인상련접적진핵표체재체pYFP-CFP,병검측융합단백CFP-YFP적FRET전이효솔,위FRET기술제공양성삼조물. 방법 이용기인중조법,이대유CFP기인서렬적질립(pCFP)위모판,확증CFP기인병삽입황색형광단백재체(pYFP)적다극륭위점중,구건진핵표체질립pYFP-CFP.경세포전염후,사기표체CFP화YFP상련적융합단백.재격광공취초현미경하채집FRET신호도화FRET전이효솔(EFRET)적계산,병비교화분석표체CFP-YFP적양성세포여CFP화YFP공표체적음성세포. 결과 진핵표체질립pYFP-CFP구건성공,병재세포질중표체,저여pCFP화pYFP공전염적세포중형광단백적분포략유불동,후자재세포포질화세포핵중균유표체.통계결과현시표체융합단백적양성조EFRET명현고우공표체적음성조,차이유통계학의의. 결론 융합형광단백분자적청색화황색단백지간구유10개안기산잔기상련,부합FRET현상발생적조건,능구채집도흔강적FRET신호,가작위FRET연구적은정양성실험삼조.
