山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
Journal of Shanxi Medical University
2015年
11期
1068-1073
,共6页
刘娟%赵俊龙%王媛媛%韩骅%秦鸿雁%张丙芳
劉娟%趙俊龍%王媛媛%韓驊%秦鴻雁%張丙芳
류연%조준룡%왕원원%한화%진홍안%장병방
LIM结构域%FHL1C%GNB2%哺乳动物双杂交%免疫共沉淀
LIM結構域%FHL1C%GNB2%哺乳動物雙雜交%免疫共沉澱
LIM결구역%FHL1C%GNB2%포유동물쌍잡교%면역공침정
LIM domain%FHL1C%GNB2%mammalian two-hybrid%co-immunoprecipitation
目的 通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制. 方法 分别构建融合质粒pCMV-GAL4-DBD-FHL1C和pCMV-VP16-GNB2,并将其共转染HeLa细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体pCMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-FHL1C共转染HeLa细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用. 结果 哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用. 结论 成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用.
目的 通過哺乳動物雙雜交及免疫共沉澱技術驗證經質譜技術穫得的LIM結構域蛋白FHL1C相互作用候選分子GNB2與FHL1C之間是否存在相互作用,從而豐富FHL1C調控Notch信號通路的機製. 方法 分彆構建融閤質粒pCMV-GAL4-DBD-FHL1C和pCMV-VP16-GNB2,併將其共轉染HeLa細胞,通過哺乳動物雙雜交實驗驗證兩者在細胞內是否具有相互作用;構建帶Flag標籤的GNB2融閤蛋白的重組載體pCMV-Flag-GNB2,酶切鑒定正確後,與帶myc標籤的FHL1C融閤蛋白的重組真覈錶達載體pCMV-myc-FHL1C共轉染HeLa細胞,利用免疫共沉澱技術檢測GNB2與FHL1C之間是否存在生理上的相互作用. 結果 哺乳動物雙雜交實驗和免疫共沉澱實驗均顯示:FHL1C與GNB2之間不存在生理上的相互作用. 結論 成功構建瞭實驗所需的GNB2的融閤蛋白真覈錶達重組載體,利用哺乳動物雙雜交實驗及免疫共沉澱技術證實FHL1C與GNB2之間不存在相互作用.
목적 통과포유동물쌍잡교급면역공침정기술험증경질보기술획득적LIM결구역단백FHL1C상호작용후선분자GNB2여FHL1C지간시부존재상호작용,종이봉부FHL1C조공Notch신호통로적궤제. 방법 분별구건융합질립pCMV-GAL4-DBD-FHL1C화pCMV-VP16-GNB2,병장기공전염HeLa세포,통과포유동물쌍잡교실험험증량자재세포내시부구유상호작용;구건대Flag표첨적GNB2융합단백적중조재체pCMV-Flag-GNB2,매절감정정학후,여대myc표첨적FHL1C융합단백적중조진핵표체재체pCMV-myc-FHL1C공전염HeLa세포,이용면역공침정기술검측GNB2여FHL1C지간시부존재생리상적상호작용. 결과 포유동물쌍잡교실험화면역공침정실험균현시:FHL1C여GNB2지간불존재생리상적상호작용. 결론 성공구건료실험소수적GNB2적융합단백진핵표체중조재체,이용포유동물쌍잡교실험급면역공침정기술증실FHL1C여GNB2지간불존재상호작용.
