中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2015年
4期
9-13
,共5页
肖厚安%周小茜%张丽%安鸿肇%刘晨%王煜%寇谦%邓旭东%贾赤宇
肖厚安%週小茜%張麗%安鴻肇%劉晨%王煜%寇謙%鄧旭東%賈赤宇
초후안%주소천%장려%안홍조%류신%왕욱%구겸%산욱동%가적우
烧伤%内皮细胞%细胞凋亡
燒傷%內皮細胞%細胞凋亡
소상%내피세포%세포조망
Burns%Pulmonary microvascular endothelial cells%Cell apoptosis
目的 探讨白藜芦醇在烧伤血清诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡中的作用及可能的分子机制.方法 (1)取5只SD大鼠背部于95℃热水浴18 s制成30％总体表面积Ⅲ度烫伤模型,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;另取5只SD大鼠不做处理,制备正常大鼠血清.(2)体外组织块法培养大鼠PMVEC,免疫组织化学法鉴定细胞.取第3代对数生长期的细胞分别接种6孔板和12孔板,各板均分为3组(每组设3个复孔):对照组、烧伤血清组、烧伤血清±白藜芦醇组.白藜芦醇在烧伤血清刺激前2h加入(浓度20 μmol/L).(3)采用铺明胶的Transwell培养细胞后,酶联免疫吸咐法检测单层细胞通透性;采用吖啶橙-溴化乙啶法检测PMVEC的凋亡;RT-PCR检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平;Western blot法检测细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达.结果 (1)原代培养细胞生长较慢,呈铺路石样生长;传代后细胞呈均匀分布生长.细胞凝血因子Ⅷ阳性表达率为(97±3)％,鉴定为PMVEC.(2)培养24h后,对照组,烧伤血清组,烧伤血清±白藜芦醇组中细胞通透性分别为(87±16)、(220±11)、(131 ±11) ng/mL(F=207.40,P＜0.05),细胞凋亡率分别为(5.2±2.3)％、(22.3±3.7)％、(11.7±2.3)％(F=69.07,P＜0.05).与对照组比较,烧伤血清组单分子层通透性、细胞凋亡率明显增加(t值分别为18.76、10.75,P值均小于0.05);烧伤血清+白藜芦醇组内皮细胞单分子层通透性、细胞凋亡率较烧伤血清组明显减少(t值分别为6.21、5.47,P值均小于0.05).(3)培养24 h后,对照组,烧伤血清组,烧伤血清+白藜芦醇组TNF-α以及IL-1β的mRNA水平分别为1.0±0.1、3.8±1.3、1.6±0.7(F=22.47,P＜0.05);1.0±0.1、3.3±1.5、1.7±0.4(F=13.01,P＜0.05);SIRT1以及Cleaved Caspase3的蛋白表达量分别为1.0±0.3、2.8±0.5、3.7±0.6(F=69.99,P＜0.05);1.0±0.2、3.3±0.5、1.9±0.6(F=28.78,P＜0.05);与对照组比较,烧伤血清组SIRT1、Cleaved Caspase3的蛋白表达量明显增加(t值分别为9.93、12.67,P值均小于0.05);烧伤血清+白藜芦醇组较烧伤血清组SIRT1的蛋白表达量明显增加(t=12.34,P＜0.05)、Cleaved Caspase3蛋白表达明显减少(t=4.12,P值均小于0.05).结论 白藜芦醇可显著抑制烧伤血清诱导的PMVEC凋亡,其机制可能与SIRT1介导的Cleaved Caspase3的下调相关.
目的 探討白藜蘆醇在燒傷血清誘導的肺微血管內皮細胞(PMVEC)凋亡中的作用及可能的分子機製.方法 (1)取5隻SD大鼠揹部于95℃熱水浴18 s製成30％總體錶麵積Ⅲ度燙傷模型,傷後24 h製備燒傷大鼠血清;另取5隻SD大鼠不做處理,製備正常大鼠血清.(2)體外組織塊法培養大鼠PMVEC,免疫組織化學法鑒定細胞.取第3代對數生長期的細胞分彆接種6孔闆和12孔闆,各闆均分為3組(每組設3箇複孔):對照組、燒傷血清組、燒傷血清±白藜蘆醇組.白藜蘆醇在燒傷血清刺激前2h加入(濃度20 μmol/L).(3)採用鋪明膠的Transwell培養細胞後,酶聯免疫吸咐法檢測單層細胞通透性;採用吖啶橙-溴化乙啶法檢測PMVEC的凋亡;RT-PCR檢測炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)以及白細胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平;Western blot法檢測細胞沉默信息調節因子1(SIRT1)以及半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶3(Caspase3)的錶達.結果 (1)原代培養細胞生長較慢,呈鋪路石樣生長;傳代後細胞呈均勻分佈生長.細胞凝血因子Ⅷ暘性錶達率為(97±3)％,鑒定為PMVEC.(2)培養24h後,對照組,燒傷血清組,燒傷血清±白藜蘆醇組中細胞通透性分彆為(87±16)、(220±11)、(131 ±11) ng/mL(F=207.40,P＜0.05),細胞凋亡率分彆為(5.2±2.3)％、(22.3±3.7)％、(11.7±2.3)％(F=69.07,P＜0.05).與對照組比較,燒傷血清組單分子層通透性、細胞凋亡率明顯增加(t值分彆為18.76、10.75,P值均小于0.05);燒傷血清+白藜蘆醇組內皮細胞單分子層通透性、細胞凋亡率較燒傷血清組明顯減少(t值分彆為6.21、5.47,P值均小于0.05).(3)培養24 h後,對照組,燒傷血清組,燒傷血清+白藜蘆醇組TNF-α以及IL-1β的mRNA水平分彆為1.0±0.1、3.8±1.3、1.6±0.7(F=22.47,P＜0.05);1.0±0.1、3.3±1.5、1.7±0.4(F=13.01,P＜0.05);SIRT1以及Cleaved Caspase3的蛋白錶達量分彆為1.0±0.3、2.8±0.5、3.7±0.6(F=69.99,P＜0.05);1.0±0.2、3.3±0.5、1.9±0.6(F=28.78,P＜0.05);與對照組比較,燒傷血清組SIRT1、Cleaved Caspase3的蛋白錶達量明顯增加(t值分彆為9.93、12.67,P值均小于0.05);燒傷血清+白藜蘆醇組較燒傷血清組SIRT1的蛋白錶達量明顯增加(t=12.34,P＜0.05)、Cleaved Caspase3蛋白錶達明顯減少(t=4.12,P值均小于0.05).結論 白藜蘆醇可顯著抑製燒傷血清誘導的PMVEC凋亡,其機製可能與SIRT1介導的Cleaved Caspase3的下調相關.
목적 탐토백려호순재소상혈청유도적폐미혈관내피세포(PMVEC)조망중적작용급가능적분자궤제.방법 (1)취5지SD대서배부우95℃열수욕18 s제성30％총체표면적Ⅲ도탕상모형,상후24 h제비소상대서혈청;령취5지SD대서불주처리,제비정상대서혈청.(2)체외조직괴법배양대서PMVEC,면역조직화학법감정세포.취제3대대수생장기적세포분별접충6공판화12공판,각판균분위3조(매조설3개복공):대조조、소상혈청조、소상혈청±백려호순조.백려호순재소상혈청자격전2h가입(농도20 μmol/L).(3)채용포명효적Transwell배양세포후,매련면역흡부법검측단층세포통투성;채용아정등-추화을정법검측PMVEC적조망;RT-PCR검측염증인자종류배사인자-α(TNF-α)이급백세포개소-1β(IL-1β)적mRNA수평;Western blot법검측세포침묵신식조절인자1(SIRT1)이급반광안산천동안산단백매3(Caspase3)적표체.결과 (1)원대배양세포생장교만,정포로석양생장;전대후세포정균균분포생장.세포응혈인자Ⅷ양성표체솔위(97±3)％,감정위PMVEC.(2)배양24h후,대조조,소상혈청조,소상혈청±백려호순조중세포통투성분별위(87±16)、(220±11)、(131 ±11) ng/mL(F=207.40,P＜0.05),세포조망솔분별위(5.2±2.3)％、(22.3±3.7)％、(11.7±2.3)％(F=69.07,P＜0.05).여대조조비교,소상혈청조단분자층통투성、세포조망솔명현증가(t치분별위18.76、10.75,P치균소우0.05);소상혈청+백려호순조내피세포단분자층통투성、세포조망솔교소상혈청조명현감소(t치분별위6.21、5.47,P치균소우0.05).(3)배양24 h후,대조조,소상혈청조,소상혈청+백려호순조TNF-α이급IL-1β적mRNA수평분별위1.0±0.1、3.8±1.3、1.6±0.7(F=22.47,P＜0.05);1.0±0.1、3.3±1.5、1.7±0.4(F=13.01,P＜0.05);SIRT1이급Cleaved Caspase3적단백표체량분별위1.0±0.3、2.8±0.5、3.7±0.6(F=69.99,P＜0.05);1.0±0.2、3.3±0.5、1.9±0.6(F=28.78,P＜0.05);여대조조비교,소상혈청조SIRT1、Cleaved Caspase3적단백표체량명현증가(t치분별위9.93、12.67,P치균소우0.05);소상혈청+백려호순조교소상혈청조SIRT1적단백표체량명현증가(t=12.34,P＜0.05)、Cleaved Caspase3단백표체명현감소(t=4.12,P치균소우0.05).결론 백려호순가현저억제소상혈청유도적PMVEC조망,기궤제가능여SIRT1개도적Cleaved Caspase3적하조상관.
