遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
5期
658-662
,共5页
侯卫红%王天云%柴玉荣%袁保梅%侯桂琴%王建民%薛乐勋
侯衛紅%王天雲%柴玉榮%袁保梅%侯桂琴%王建民%薛樂勛
후위홍%왕천운%시옥영%원보매%후계금%왕건민%설악훈
canstatin%血管生成抑制素%RT-PCR%cDNA克隆
canstatin%血管生成抑製素%RT-PCR%cDNA剋隆
canstatin%혈관생성억제소%RT-PCR%cDNA극륭
以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠canstatin及其N端片段基因,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析.将小鼠canstatin及其N端片段基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,分别构建表达质粒pET/Can和pET/Can-N,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.结果表明: 小鼠canstatin的cDNA长度为684bp,编码227个氨基酸,与已知的人canstatin cDNA同源性为89%,氨基酸的同源性为96%.小鼠canstatin N端片段(1-95aa)与人的同源性为100%. IPTG诱导原核表达载体pET/Can和pET/Can-N在大肠杆菌 BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白量的35% 和 18%,重组蛋白主要以包涵体形式存在.文中报道的小鼠canstatin 及其N端片段核苷酸序列已收入GenBank,接受号分别为: AY375463和AY502946.
以小鼠肝髒組織總RNA為模闆,通過RT-PCR擴增小鼠canstatin及其N耑片段基因,剋隆到pMD18-T載體中併進行序列分析.將小鼠canstatin及其N耑片段基因定嚮剋隆于原覈錶達載體pET30a(+)中,分彆構建錶達質粒pET/Can和pET/Can-N,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達.結果錶明: 小鼠canstatin的cDNA長度為684bp,編碼227箇氨基痠,與已知的人canstatin cDNA同源性為89%,氨基痠的同源性為96%.小鼠canstatin N耑片段(1-95aa)與人的同源性為100%. IPTG誘導原覈錶達載體pET/Can和pET/Can-N在大腸桿菌 BL21(DE3)中的錶達量約佔菌體總蛋白量的35% 和 18%,重組蛋白主要以包涵體形式存在.文中報道的小鼠canstatin 及其N耑片段覈苷痠序列已收入GenBank,接受號分彆為: AY375463和AY502946.
이소서간장조직총RNA위모판,통과RT-PCR확증소서canstatin급기N단편단기인,극륭도pMD18-T재체중병진행서렬분석.장소서canstatin급기N단편단기인정향극륭우원핵표체재체pET30a(+)중,분별구건표체질립pET/Can화pET/Can-N,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체.결과표명: 소서canstatin적cDNA장도위684bp,편마227개안기산,여이지적인canstatin cDNA동원성위89%,안기산적동원성위96%.소서canstatin N단편단(1-95aa)여인적동원성위100%. IPTG유도원핵표체재체pET/Can화pET/Can-N재대장간균 BL21(DE3)중적표체량약점균체총단백량적35% 화 18%,중조단백주요이포함체형식존재.문중보도적소서canstatin 급기N단편단핵감산서렬이수입GenBank,접수호분별위: AY375463화AY502946.
