山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
11期
18-20
,共3页
肿瘤抑素%慢病毒载体%转移,基因
腫瘤抑素%慢病毒載體%轉移,基因
종류억소%만병독재체%전이,기인
目的 构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用.方法 采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的 基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒PGC-Fu[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum,通过酶切、测序验证Tumstatin基因后,将pGC-FU-Tum质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelpe2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tumstatin基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-Fu-Tum,并转染人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Wstem blot检测目的 蛋白Tumstatin的表达.结果 pGC-FU-Tum中携有正确的Tumstatin基因;pGC-FUTurn共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒GC-FU-Tum;目的 基因Tumstatin能被重组慢病毒高效地转导入HUVEC,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,Western blot能检测到Tumstatin蛋白在靶细胞中的表达.结论 成功构建了携带Tumstatin基因的重组慢病毒载体;其蛋白表达与EGFP-致..
目的 構建Tumstatin基因慢病毒錶達載體,進一步研究Tumstatin基因的功能及其在腫瘤治療中的應用.方法 採用PCR技術從含有Tumstatin基因的質粒pSPORT1-Sfi擴增目的 基因Tumstatin,併將基因剋隆到慢病毒載體錶達質粒PGC-Fu[含增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因]中,構建慢病毒載體錶達質粒pGC-FU-Tum,通過酶切、測序驗證Tumstatin基因後,將pGC-FU-Tum質粒和包裝質粒pHelper1.0、pHelpe2.0共同轉染人胚胎腎上皮細胞繫293T細胞,穫得攜帶Tumstatin基因和EGFP基因的重組慢病毒GC-Fu-Tum,併轉染人臍靜脈血管內皮細胞HUVEC,Wstem blot檢測目的 蛋白Tumstatin的錶達.結果 pGC-FU-Tum中攜有正確的Tumstatin基因;pGC-FUTurn共轉染包裝細胞293T能產生高濃度的重組慢病毒GC-FU-Tum;目的 基因Tumstatin能被重組慢病毒高效地轉導入HUVEC,熒光顯微鏡下能直接觀察到EGFP,Western blot能檢測到Tumstatin蛋白在靶細胞中的錶達.結論 成功構建瞭攜帶Tumstatin基因的重組慢病毒載體;其蛋白錶達與EGFP-緻..
목적 구건Tumstatin기인만병독표체재체,진일보연구Tumstatin기인적공능급기재종류치료중적응용.방법 채용PCR기술종함유Tumstatin기인적질립pSPORT1-Sfi확증목적 기인Tumstatin,병장기인극륭도만병독재체표체질립PGC-Fu[함증강형록색형광단백(EGFP)기인]중,구건만병독재체표체질립pGC-FU-Tum,통과매절、측서험증Tumstatin기인후,장pGC-FU-Tum질립화포장질립pHelper1.0、pHelpe2.0공동전염인배태신상피세포계293T세포,획득휴대Tumstatin기인화EGFP기인적중조만병독GC-Fu-Tum,병전염인제정맥혈관내피세포HUVEC,Wstem blot검측목적 단백Tumstatin적표체.결과 pGC-FU-Tum중휴유정학적Tumstatin기인;pGC-FUTurn공전염포장세포293T능산생고농도적중조만병독GC-FU-Tum;목적 기인Tumstatin능피중조만병독고효지전도입HUVEC,형광현미경하능직접관찰도EGFP,Western blot능검측도Tumstatin단백재파세포중적표체.결론 성공구건료휴대Tumstatin기인적중조만병독재체;기단백표체여EGFP-치..
