CAJ | 학술논문

为研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)在骨骼发育中的作用,我们以含有LoxPneo的pBSK/U6载体为骨架,构建小鼠BMP4条件性RNAi(conditional RNA interference),CRNA;载体(BMP4CRNAi),经Kpn Ⅰ和AflⅢ双酶切获取针对bmp4并含neo基因的目的干扰片段,纯化后的目的片段显微注射入0.5 d的FVB/NJ小鼠受精卵,并植入同期发情的假孕母鼠中,获取G0代转基因小鼠;利用PCR对G0代转基因小鼠基因型进行鉴定,PCR阳性的小鼠与FVB/NJ小鼠交配,最终获取稳定传代的BMP4CRNAi小鼠.稳定传代的BMP4CRNAi小鼠与成骨和软骨前体细胞表达Cre的转基因小鼠(Col2a1-Cre)交配,获取BMP4Col2a1-CRNAi小鼠.分离BMP4Col2a1-CRNAi小鼠原代软骨细胞,提取总RNA,利用半定量RT-PCR检测RNA干扰效率.小鼠基因型鉴定结果表明:成功获得条件性RNAi转基因小鼠;BMP4干扰效率检测结果表明:在软骨细胞中BMP4的干扰效率为81%.以上结果表明,我们成功制备了BMP4CRNAi小鼠和BMP4Col2a1-CRNAi小鼠,BMP4CRNAi小鼠与不同Cre转基因小鼠交配,可以研究BMP4在不同细胞、组织和器官的功能,BMP4Col2a1-CRNAi小鼠的获得为研究BMP4在软骨发育中的作用提供了合适的动物模型.
위연구골형성단백4(Bone morphogenetic protein 4,BMP4)재골격발육중적작용,아문이함유LoxPneo적pBSK/U6재체위골가,구건소서BMP4조건성RNAi(conditional RNA interference),CRNA;재체(BMP4CRNAi),경Kpn Ⅰ화AflⅢ쌍매절획취침대bmp4병함neo기인적목적간우편단,순화후적목적편단현미주사입0.5 d적FVB/NJ소서수정란,병식입동기발정적가잉모서중,획취G0대전기인소서;이용PCR대G0대전기인소서기인형진행감정,PCR양성적소서여FVB/NJ소서교배,최종획취은정전대적BMP4CRNAi소서.은정전대적BMP4CRNAi소서여성골화연골전체세포표체Cre적전기인소서(Col2a1-Cre)교배,획취BMP4Col2a1-CRNAi소서.분리BMP4Col2a1-CRNAi소서원대연골세포,제취총RNA,이용반정량RT-PCR검측RNA간우효솔.소서기인형감정결과표명:성공획득조건성RNAi전기인소서;BMP4간우효솔검측결과표명:재연골세포중BMP4적간우효솔위81%.이상결과표명,아문성공제비료BMP4CRNAi소서화BMP4Col2a1-CRNAi소서,BMP4CRNAi소서여불동Cre전기인소서교배,가이연구BMP4재불동세포、조직화기관적공능,BMP4Col2a1-CRNAi소서적획득위연구BMP4재연골발육중적작용제공료합괄적동물모형.