CAJ | 학술논문

寡核苷酸文库的聚合酶链反应(PCR)扩增是指数富集系统配基进化技术(SELEX)筛选适配子技术中的重要步骤.本研究采用毛细管电泳技术结合激光诱导荧光检测器(CE-LIF),通过对双链产物、PCR副产物以及剩余引物的考察,研究了寡核苷酸文库PCR扩增时的影响因素,并对其进行优化.结果表明,随机寡核苷酸文库的扩增与传统均一模板的扩增显著不同,其在扩增十几个循环时产物就达到最大值;此外,初始模板数、退火温度、DNA聚合酶浓度等条件也有所不同.因此, 在进行SELEX筛选之前必须对文库PCR条件进行详细优化.本研究中N39文库优化后的PCR扩增条件为:初始模板的量为105个分子,DNA聚合酶浓度0.05 U/μL,退火温度70 ℃,18个循环.本研究为利用SELEX技术有效筛选适配子,降低筛选的假阳性及提高特异性提供了参考依据.
과핵감산문고적취합매련반응(PCR)확증시지수부집계통배기진화기술(SELEX)사선괄배자기술중적중요보취.본연구채용모세관전영기술결합격광유도형광검측기(CE-LIF),통과대쌍련산물、PCR부산물이급잉여인물적고찰,연구료과핵감산문고PCR확증시적영향인소,병대기진행우화.결과표명,수궤과핵감산문고적확증여전통균일모판적확증현저불동,기재확증십궤개순배시산물취체도최대치;차외,초시모판수、퇴화온도、DNA취합매농도등조건야유소불동.인차, 재진행SELEX사선지전필수대문고PCR조건진행상세우화.본연구중N39문고우화후적PCR확증조건위:초시모판적량위105개분자,DNA취합매농도0.05 U/μL,퇴화온도70 ℃,18개순배.본연구위이용SELEX기술유효사선괄배자,강저사선적가양성급제고특이성제공료삼고의거.