山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
33期
16-18
,共3页
涂燕%李振江%汤爱萍%李慧慧%贺文凤%李洁%张冉
塗燕%李振江%湯愛萍%李慧慧%賀文鳳%李潔%張冉
도연%리진강%탕애평%리혜혜%하문봉%리길%장염
细胞外基质金属蛋白酶诱导因子%RNA干扰%慢病毒载体
細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子%RNA榦擾%慢病毒載體
세포외기질금속단백매유도인자%RNA간우%만병독재체
目的 构建人细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN) RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法 参照文献设计RNAi靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生RNAi慢病毒载体pGC-LV.PCR鉴定阳性克隆并测序,将测序正确的pGC-LV、pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒经脂质体2000共转染293T细胞,获得重组慢病毒,用逐孔稀释法测定病毒滴度.结果 合成的含EMMPRIN vshRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确；病毒包装后滴度为1×109 TU/ml.结论 应用基因工程技术成功构建了可供感染的EMMPRIN基因RNAi慢病毒载体,此为进一步研究EMMPRIN在急性白血病中的作用奠定了实验基础.
目的 構建人細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN) RNA榦擾(RNAi)慢病毒載體.方法 參照文獻設計RNAi靶點序列,閤成靶序列的Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與經Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切後的pGCSIL-GFP載體連接產生RNAi慢病毒載體pGC-LV.PCR鑒定暘性剋隆併測序,將測序正確的pGC-LV、pHelper 1.0和pHelper 2.0質粒經脂質體2000共轉染293T細胞,穫得重組慢病毒,用逐孔稀釋法測定病毒滴度.結果 閤成的含EMMPRIN vshRNA慢病毒載體寡覈苷痠鏈插入正確；病毒包裝後滴度為1×109 TU/ml.結論 應用基因工程技術成功構建瞭可供感染的EMMPRIN基因RNAi慢病毒載體,此為進一步研究EMMPRIN在急性白血病中的作用奠定瞭實驗基礎.
목적 구건인세포외기질금속단백매유도인자(EMMPRIN) RNA간우(RNAi)만병독재체.방법 삼조문헌설계RNAi파점서렬,합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경Age Ⅰ화EcoR Ⅰ매절후적pGCSIL-GFP재체련접산생RNAi만병독재체pGC-LV.PCR감정양성극륭병측서,장측서정학적pGC-LV、pHelper 1.0화pHelper 2.0질립경지질체2000공전염293T세포,획득중조만병독,용축공희석법측정병독적도.결과 합성적함EMMPRIN vshRNA만병독재체과핵감산련삽입정학；병독포장후적도위1×109 TU/ml.결론 응용기인공정기술성공구건료가공감염적EMMPRIN기인RNAi만병독재체,차위진일보연구EMMPRIN재급성백혈병중적작용전정료실험기출.
