山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
15期
45-47
,共3页
王玉彬%吕金钢%苏荣健%王光川%巴彩凤
王玉彬%呂金鋼%囌榮健%王光川%巴綵鳳
왕옥빈%려금강%소영건%왕광천%파채봉
肥胖%黑素皮质素受体-4%同源重组%腺病毒载体
肥胖%黑素皮質素受體-4%同源重組%腺病毒載體
비반%흑소피질소수체-4%동원중조%선병독재체
目的 构建黑素皮质素受体-4(MC4R)重组腺病毒表达载体,为肥胖症的基因治疗研究奠定基础.方法 PCR扩增犬MC4R目的 基因后与T载体连接,双酶切鉴定正确的T-A载体获得具有黏性末端的MCAR目的 基因;将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,构建穿梭载体pShuttle-CMV/MC4R;Pme Ⅰ单酶切pshuttle-CMV/犬MC4R后,转化到含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;筛选阳性克隆子;Pac Ⅰ酶切鉴定.结果 线性化的pShuttle-CMV/MC4R转化含pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,16 h后获得阳性克隆子,经Pac Ⅰ酶切鉴定出一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,通过Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ双酶切切下约1 000 bp的片段,含MC4R目的 基因的重组腺病毒载体构建成功.结论 细菌内同源重组法可高效、快捷的制备含犬MC4R的重组腺病毒载体;该载体为人类肥胖症的基因治疗研究奠定了基础.
目的 構建黑素皮質素受體-4(MC4R)重組腺病毒錶達載體,為肥胖癥的基因治療研究奠定基礎.方法 PCR擴增犬MC4R目的 基因後與T載體連接,雙酶切鑒定正確的T-A載體穫得具有黏性末耑的MCAR目的 基因;將其亞剋隆至腺病毒穿梭載體pShuttle-CMV中,構建穿梭載體pShuttle-CMV/MC4R;Pme Ⅰ單酶切pshuttle-CMV/犬MC4R後,轉化到含pAdeasy-1的BJ5183感受態細胞,採用細菌內同源重組法構建腺病毒載體pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;篩選暘性剋隆子;Pac Ⅰ酶切鑒定.結果 線性化的pShuttle-CMV/MC4R轉化含pAdeasy-1的BJ5183感受態細胞,16 h後穫得暘性剋隆子,經Pac Ⅰ酶切鑒定齣一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特徵性片段,通過Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ雙酶切切下約1 000 bp的片段,含MC4R目的 基因的重組腺病毒載體構建成功.結論 細菌內同源重組法可高效、快捷的製備含犬MC4R的重組腺病毒載體;該載體為人類肥胖癥的基因治療研究奠定瞭基礎.
목적 구건흑소피질소수체-4(MC4R)중조선병독표체재체,위비반증적기인치료연구전정기출.방법 PCR확증견MC4R목적 기인후여T재체련접,쌍매절감정정학적T-A재체획득구유점성말단적MCAR목적 기인;장기아극륭지선병독천사재체pShuttle-CMV중,구건천사재체pShuttle-CMV/MC4R;Pme Ⅰ단매절pshuttle-CMV/견MC4R후,전화도함pAdeasy-1적BJ5183감수태세포,채용세균내동원중조법구건선병독재체pAdeasy-1/pshuttle-CMV/MC4R;사선양성극륭자;Pac Ⅰ매절감정.결과 선성화적pShuttle-CMV/MC4R전화함pAdeasy-1적BJ5183감수태세포,16 h후획득양성극륭자,경Pac Ⅰ매절감정출일대우20 kb적대편단화3.0 kb적특정성편단,통과Bgl Ⅱ、Xho Ⅰ쌍매절절하약1 000 bp적편단,함MC4R목적 기인적중조선병독재체구건성공.결론 세균내동원중조법가고효、쾌첩적제비함견MC4R적중조선병독재체;해재체위인류비반증적기인치료연구전정료기출.
