山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
12期
17-19
,共3页
陈章权%陆田田%黄震%梁晓东
陳章權%陸田田%黃震%樑曉東
진장권%륙전전%황진%량효동
肥大细胞羧肽酶%小鼠%肥大细胞羧肽酶截短体
肥大細胞羧肽酶%小鼠%肥大細胞羧肽酶截短體
비대세포최태매%소서%비대세포최태매절단체
目的 建立检测人肥大细胞羧肽酶(hMCCP)的双抗体夹心ELISA法,以hMCCP截短体免疫小鼠,制备鼠源性多克隆抗体.方法 PCR法扩增hMCCP-N118基因片段,克隆至pET28原核表达载体,转化大肠杆菌Rosseta(DE3).用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化目的 蛋白.用纯化重组蛋白免疫小鼠,制备抗hMCCP-N118抗体.间接ELISA测定抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性.结果 hMCCP截短体在大肠杆菌中高效表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了鼠抗hMCCP-N118抗体,效价达1∶6 400,该抗体能特异结合hMCCP.结论 成功地制备了效价高、特异性好的鼠抗hMCCP截短体抗体.
目的 建立檢測人肥大細胞羧肽酶(hMCCP)的雙抗體夾心ELISA法,以hMCCP截短體免疫小鼠,製備鼠源性多剋隆抗體.方法 PCR法擴增hMCCP-N118基因片段,剋隆至pET28原覈錶達載體,轉化大腸桿菌Rosseta(DE3).用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白的錶達,用Ni2+-NTA凝膠親和層析純化目的 蛋白.用純化重組蛋白免疫小鼠,製備抗hMCCP-N118抗體.間接ELISA測定抗體效價,Western blot鑒定抗體特異性.結果 hMCCP截短體在大腸桿菌中高效錶達,用純化的重組蛋白免疫小鼠,穫得瞭鼠抗hMCCP-N118抗體,效價達1∶6 400,該抗體能特異結閤hMCCP.結論 成功地製備瞭效價高、特異性好的鼠抗hMCCP截短體抗體.
목적 건립검측인비대세포최태매(hMCCP)적쌍항체협심ELISA법,이hMCCP절단체면역소서,제비서원성다극륭항체.방법 PCR법확증hMCCP-N118기인편단,극륭지pET28원핵표체재체,전화대장간균Rosseta(DE3).용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도중조단백적표체,용Ni2+-NTA응효친화층석순화목적 단백.용순화중조단백면역소서,제비항hMCCP-N118항체.간접ELISA측정항체효개,Western blot감정항체특이성.결과 hMCCP절단체재대장간균중고효표체,용순화적중조단백면역소서,획득료서항hMCCP-N118항체,효개체1∶6 400,해항체능특이결합hMCCP.결론 성공지제비료효개고、특이성호적서항hMCCP절단체항체.
