遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
5期
567-573
,共7页
刘峰涛%颜景斌%任兆瑞%黄淑帧%曾溢滔
劉峰濤%顏景斌%任兆瑞%黃淑幀%曾溢滔
류봉도%안경빈%임조서%황숙정%증일도
催乳素%乳铁蛋白%血小板生成素%表达
催乳素%乳鐵蛋白%血小闆生成素%錶達
최유소%유철단백%혈소판생성소%표체
为探讨应用牛催乳素促进乳腺生物反应器高效表达外源蛋白(如人乳铁蛋白、人血小板生成素)的可行性,构建两种牛催乳素和外源基因乳腺共表达载体.一种为牛催乳素基因和外源基因共用一个6.7 kb山羊β-酪蛋白启动子启动转录,两个基因以内部核糖体进入位点(IRES)连接;另一种为外源基因利用6.7 kb山羊β-酪蛋白启动子,催乳素基因利用2.0 kb山羊β-酪蛋白启动子,分别转录.脂质体转染后,RT-PCR以及ELISA分析结果证实外源基因的表达得到提高.在COS-7细胞(猴胚肾细胞),两种载体分别使乳铁蛋白的表达由12.6 μg/L提高到18.4 μg/L和37.2 μg/L(P<0.05);在HC-11细胞(小鼠乳腺上皮细胞),两种载体分别使乳铁蛋白的表达由13.7μg/L提高到20.7 μg/L和19.9 μg/L(P<0.05).利用双启动子载体,使人血小板生成素在COS-7细胞由572 ng/L提高到1340 ng/L(P<0.05);在HC-11细胞由783 ng/L提高1040 ng/L(P<0.05).结果证明催乳素可以有效的提高外源基因在哺乳类细胞的表达.
為探討應用牛催乳素促進乳腺生物反應器高效錶達外源蛋白(如人乳鐵蛋白、人血小闆生成素)的可行性,構建兩種牛催乳素和外源基因乳腺共錶達載體.一種為牛催乳素基因和外源基因共用一箇6.7 kb山羊β-酪蛋白啟動子啟動轉錄,兩箇基因以內部覈糖體進入位點(IRES)連接;另一種為外源基因利用6.7 kb山羊β-酪蛋白啟動子,催乳素基因利用2.0 kb山羊β-酪蛋白啟動子,分彆轉錄.脂質體轉染後,RT-PCR以及ELISA分析結果證實外源基因的錶達得到提高.在COS-7細胞(猴胚腎細胞),兩種載體分彆使乳鐵蛋白的錶達由12.6 μg/L提高到18.4 μg/L和37.2 μg/L(P<0.05);在HC-11細胞(小鼠乳腺上皮細胞),兩種載體分彆使乳鐵蛋白的錶達由13.7μg/L提高到20.7 μg/L和19.9 μg/L(P<0.05).利用雙啟動子載體,使人血小闆生成素在COS-7細胞由572 ng/L提高到1340 ng/L(P<0.05);在HC-11細胞由783 ng/L提高1040 ng/L(P<0.05).結果證明催乳素可以有效的提高外源基因在哺乳類細胞的錶達.
위탐토응용우최유소촉진유선생물반응기고효표체외원단백(여인유철단백、인혈소판생성소)적가행성,구건량충우최유소화외원기인유선공표체재체.일충위우최유소기인화외원기인공용일개6.7 kb산양β-락단백계동자계동전록,량개기인이내부핵당체진입위점(IRES)련접;령일충위외원기인이용6.7 kb산양β-락단백계동자,최유소기인이용2.0 kb산양β-락단백계동자,분별전록.지질체전염후,RT-PCR이급ELISA분석결과증실외원기인적표체득도제고.재COS-7세포(후배신세포),량충재체분별사유철단백적표체유12.6 μg/L제고도18.4 μg/L화37.2 μg/L(P<0.05);재HC-11세포(소서유선상피세포),량충재체분별사유철단백적표체유13.7μg/L제고도20.7 μg/L화19.9 μg/L(P<0.05).이용쌍계동자재체,사인혈소판생성소재COS-7세포유572 ng/L제고도1340 ng/L(P<0.05);재HC-11세포유783 ng/L제고1040 ng/L(P<0.05).결과증명최유소가이유효적제고외원기인재포유류세포적표체.
