遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
6期
836-840
,共5页
柳淑芳%杜立新%朱靖%王爱华%李宏滨
柳淑芳%杜立新%硃靖%王愛華%李宏濱
류숙방%두립신%주정%왕애화%리굉빈
DDRT-PCR%正交优化%非变性PAGE%银染%反向Northern
DDRT-PCR%正交優化%非變性PAGE%銀染%反嚮Northern
DDRT-PCR%정교우화%비변성PAGE%은염%반향Northern
mRNA 差异显示PCR( mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响.采用正交法优化DDRT-PCR反应条件,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用,一次PCR反应即可确定最佳反应组合.将筛选出的条件用于DDRT-PCR,得到差显结果假阳性率低,重复性和稳定性好,而且简化了反应条件的优选程序,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法.为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序,降低假阳性率,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法,并用反向Northern法来验证回收条带,从而更加优化了差异显示反应体系.
mRNA 差異顯示PCR( mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)是分離差異錶達基因的有效方法,但該方法的準確性極易受到外部因素和內部因素的影響.採用正交法優化DDRT-PCR反應條件,充分攷慮到模闆濃度、錨定引物濃度、隨機引物濃度、dNTPs濃度、鎂離子濃度以及Taq酶用量等因素在差異顯示反應過程中的交互作用,一次PCR反應即可確定最佳反應組閤.將篩選齣的條件用于DDRT-PCR,得到差顯結果假暘性率低,重複性和穩定性好,而且簡化瞭反應條件的優選程序,這錶明正交法是優化差異顯示反應條件的理想方法.為瞭進一步簡化整箇差異顯示反應繫統的操作程序,降低假暘性率,研究採用瞭非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和銀染顯示差異帶的方法,併用反嚮Northern法來驗證迴收條帶,從而更加優化瞭差異顯示反應體繫.
mRNA 차이현시PCR( mRNA differential display PCR,DDRT-PCR)시분리차이표체기인적유효방법,단해방법적준학성겁역수도외부인소화내부인소적영향.채용정교법우화DDRT-PCR반응조건,충분고필도모판농도、묘정인물농도、수궤인물농도、dNTPs농도、미리자농도이급Taq매용량등인소재차이현시반응과정중적교호작용,일차PCR반응즉가학정최가반응조합.장사선출적조건용우DDRT-PCR,득도차현결과가양성솔저,중복성화은정성호,이차간화료반응조건적우선정서,저표명정교법시우화차이현시반응조건적이상방법.위료진일보간화정개차이현시반응계통적조작정서,강저가양성솔,연구채용료비변성취병희선알응효전영(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)화은염현시차이대적방법,병용반향Northern법래험증회수조대,종이경가우화료차이현시반응체계.
