山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
34期
27-29
,共3页
腺病毒%胰岛素样生长因子-1%短发夹RNA%神经元%轴突%胰腺癌
腺病毒%胰島素樣生長因子-1%短髮夾RNA%神經元%軸突%胰腺癌
선병독%이도소양생장인자-1%단발협RNA%신경원%축돌%이선암
目的 观察重组腺病毒介导的干扰胰岛素样生长因子1(IGF-1)的短发夹RNA(shRNA)对SD孕鼠背根神经节神经元(DRGn)突起生长的影响.方法 设计、合成三对靶向IGF-1的单链寡核苷酸,经变性、退火为双链寡核苷酸并插入pENTR/U6质粒载体；测序正确后经LipofectamineTM2000转染胰腺癌MIA PACA-2细胞,采用RT-PCR法选出对IGF-1干扰效果最佳的pENTR/U6-shRNA-IGF-1质粒,将其与pAd/BLOCK-iTTM-DEST骨架质粒同源重组,用HEK293A细胞包装出表达shRNA-IGF-1的重组腺病毒后测定病毒滴度.将pAd-shRNA-IGF-1感染MIA PACA-2细胞,采用免疫细胞化学法检测细胞内的IGF-1.将构建的pAd-shRNA-IGF-1感染MIA PACA-2细胞,然后与SD孕鼠DRGn体外共培养,显微镜下观察其形态变化及生长情况.结果 与未感染pAd-shRNA-IGF-1的MIA PACA-2细胞共培养的DRGn,其突起逐渐增多并相互连接成网状,形成稀疏的神经网络；而与感染pAd-shRNA-IGF-1的MIA PACA-2细胞共培养的DRGn,其细胞数量较前稍减少,并没有形成网状结构,只见到少量小的神经突起.结论 pAd-shRNA-IGF-1可抑制SD孕鼠DRGn轴突的生长.
目的 觀察重組腺病毒介導的榦擾胰島素樣生長因子1(IGF-1)的短髮夾RNA(shRNA)對SD孕鼠揹根神經節神經元(DRGn)突起生長的影響.方法 設計、閤成三對靶嚮IGF-1的單鏈寡覈苷痠,經變性、退火為雙鏈寡覈苷痠併插入pENTR/U6質粒載體；測序正確後經LipofectamineTM2000轉染胰腺癌MIA PACA-2細胞,採用RT-PCR法選齣對IGF-1榦擾效果最佳的pENTR/U6-shRNA-IGF-1質粒,將其與pAd/BLOCK-iTTM-DEST骨架質粒同源重組,用HEK293A細胞包裝齣錶達shRNA-IGF-1的重組腺病毒後測定病毒滴度.將pAd-shRNA-IGF-1感染MIA PACA-2細胞,採用免疫細胞化學法檢測細胞內的IGF-1.將構建的pAd-shRNA-IGF-1感染MIA PACA-2細胞,然後與SD孕鼠DRGn體外共培養,顯微鏡下觀察其形態變化及生長情況.結果 與未感染pAd-shRNA-IGF-1的MIA PACA-2細胞共培養的DRGn,其突起逐漸增多併相互連接成網狀,形成稀疏的神經網絡；而與感染pAd-shRNA-IGF-1的MIA PACA-2細胞共培養的DRGn,其細胞數量較前稍減少,併沒有形成網狀結構,隻見到少量小的神經突起.結論 pAd-shRNA-IGF-1可抑製SD孕鼠DRGn軸突的生長.
목적 관찰중조선병독개도적간우이도소양생장인자1(IGF-1)적단발협RNA(shRNA)대SD잉서배근신경절신경원(DRGn)돌기생장적영향.방법 설계、합성삼대파향IGF-1적단련과핵감산,경변성、퇴화위쌍련과핵감산병삽입pENTR/U6질립재체；측서정학후경LipofectamineTM2000전염이선암MIA PACA-2세포,채용RT-PCR법선출대IGF-1간우효과최가적pENTR/U6-shRNA-IGF-1질립,장기여pAd/BLOCK-iTTM-DEST골가질립동원중조,용HEK293A세포포장출표체shRNA-IGF-1적중조선병독후측정병독적도.장pAd-shRNA-IGF-1감염MIA PACA-2세포,채용면역세포화학법검측세포내적IGF-1.장구건적pAd-shRNA-IGF-1감염MIA PACA-2세포,연후여SD잉서DRGn체외공배양,현미경하관찰기형태변화급생장정황.결과 여미감염pAd-shRNA-IGF-1적MIA PACA-2세포공배양적DRGn,기돌기축점증다병상호련접성망상,형성희소적신경망락；이여감염pAd-shRNA-IGF-1적MIA PACA-2세포공배양적DRGn,기세포수량교전초감소,병몰유형성망상결구,지견도소량소적신경돌기.결론 pAd-shRNA-IGF-1가억제SD잉서DRGn축돌적생장.
