分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2009年
4期
489-494
,共6页
杨会勇%奚涛%梁超%陈之遥%徐定邦%周国华
楊會勇%奚濤%樑超%陳之遙%徐定邦%週國華
양회용%해도%량초%진지요%서정방%주국화
焦测序%指数线性扩增%单链核酸模板的制备%单核苷酸多态性
焦測序%指數線性擴增%單鏈覈痠模闆的製備%單覈苷痠多態性
초측서%지수선성확증%단련핵산모판적제비%단핵감산다태성
建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法,以包含SNP6位点一段78bp序列为对象,采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增,通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异性,设计反应液A和B处理PCR产物中干扰焦测序的限制性引物、未完全反应的产物、焦磷酸和dNTPs等杂质, 处理后1～2 μL PCR产物就可直接用于焦测序检测.测定了BRCA1基因中5个乳腺癌相关的SNP位点,获得的图谱无非特异性信号,测得序列与参考序列一致,能够进行SNP分析,表明本方法可以制备高质量焦测序单链模板,且使焦测序的成本显著降低,操作更为简便,减少了操作过程中样本间的交叉污染,有利于焦测序样品预处理的自动化.
建立瞭一種簡單的焦燐痠測序用單鏈模闆製備方法,以包含SNP6位點一段78bp序列為對象,採用非熱啟動Taq酶進行指數線性PCR擴增,通過加入甘油、BSA等PCR增彊劑增加反應的效率和特異性,設計反應液A和B處理PCR產物中榦擾焦測序的限製性引物、未完全反應的產物、焦燐痠和dNTPs等雜質, 處理後1～2 μL PCR產物就可直接用于焦測序檢測.測定瞭BRCA1基因中5箇乳腺癌相關的SNP位點,穫得的圖譜無非特異性信號,測得序列與參攷序列一緻,能夠進行SNP分析,錶明本方法可以製備高質量焦測序單鏈模闆,且使焦測序的成本顯著降低,操作更為簡便,減少瞭操作過程中樣本間的交扠汙染,有利于焦測序樣品預處理的自動化.
건립료일충간단적초린산측서용단련모판제비방법,이포함SNP6위점일단78bp서렬위대상,채용비열계동Taq매진행지수선성PCR확증,통과가입감유、BSA등PCR증강제증가반응적효솔화특이성,설계반응액A화B처리PCR산물중간우초측서적한제성인물、미완전반응적산물、초린산화dNTPs등잡질, 처리후1～2 μL PCR산물취가직접용우초측서검측.측정료BRCA1기인중5개유선암상관적SNP위점,획득적도보무비특이성신호,측득서렬여삼고서렬일치,능구진행SNP분석,표명본방법가이제비고질량초측서단련모판,차사초측서적성본현저강저,조작경위간편,감소료조작과정중양본간적교차오염,유리우초측서양품예처리적자동화.
