分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2013年
4期
488-493
,共6页
沈国林%钟玉环%原梅%庄笑梅%李桦
瀋國林%鐘玉環%原梅%莊笑梅%李樺
침국림%종옥배%원매%장소매%리화
细胞色素P450酶%探针底物%代谢产物%液相色谱-质谱联用%肝微粒体
細胞色素P450酶%探針底物%代謝產物%液相色譜-質譜聯用%肝微粒體
세포색소P450매%탐침저물%대사산물%액상색보-질보련용%간미립체
应用超高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量测定6个细胞色素P450酶(CYP)探针代谢产物的方法.用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀肝微粒体孵育液中的蛋白,在ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,35μm)上,以5 mmol/L甲酸铵和0.1％甲酸-乙腈为流动相,梯度分离待测物.在串联质谱正离子多反应监测模式下定量检测待测物.方法学验证结果表明,6个代谢产物在1.0 ～ 1000.0 μg/L的范围内均呈良好的线性关系(r2 ＞0.994)；定量限为1μg/L;方法的日内和日间精密度(RSD)均小于12％；加标回收率为92.8％ ～ 104.4％；不同储存条件下样品稳定性实验的浓度偏差(RSD)小于10％.人肝微粒体活性测定的结果显示CYP1 A2和CYP3 A4的酶活性最强,分别为(466.1 ±32.1)和(694.3±11.7) pmole/(mg·min),与最低的CYP2C19酶活性分别相差27.7和41.3倍.本方法简便、快速、灵敏,适用于大量化合物CYP酶诱导和抑制评价的酶活性测定.
應用超高效液相色譜-質譜聯用技術(LC-MS/MS),建立瞭同時定量測定6箇細胞色素P450酶(CYP)探針代謝產物的方法.用甲醇和乙腈混閤溶劑沉澱肝微粒體孵育液中的蛋白,在ZORBAX-C18色譜柱(100 mm×4.6 mm,35μm)上,以5 mmol/L甲痠銨和0.1％甲痠-乙腈為流動相,梯度分離待測物.在串聯質譜正離子多反應鑑測模式下定量檢測待測物.方法學驗證結果錶明,6箇代謝產物在1.0 ～ 1000.0 μg/L的範圍內均呈良好的線性關繫(r2 ＞0.994)；定量限為1μg/L;方法的日內和日間精密度(RSD)均小于12％；加標迴收率為92.8％ ～ 104.4％；不同儲存條件下樣品穩定性實驗的濃度偏差(RSD)小于10％.人肝微粒體活性測定的結果顯示CYP1 A2和CYP3 A4的酶活性最彊,分彆為(466.1 ±32.1)和(694.3±11.7) pmole/(mg·min),與最低的CYP2C19酶活性分彆相差27.7和41.3倍.本方法簡便、快速、靈敏,適用于大量化閤物CYP酶誘導和抑製評價的酶活性測定.
응용초고효액상색보-질보련용기술(LC-MS/MS),건립료동시정량측정6개세포색소P450매(CYP)탐침대사산물적방법.용갑순화을정혼합용제침정간미립체부육액중적단백,재ZORBAX-C18색보주(100 mm×4.6 mm,35μm)상,이5 mmol/L갑산안화0.1％갑산-을정위류동상,제도분리대측물.재천련질보정리자다반응감측모식하정량검측대측물.방법학험증결과표명,6개대사산물재1.0 ～ 1000.0 μg/L적범위내균정량호적선성관계(r2 ＞0.994)；정량한위1μg/L;방법적일내화일간정밀도(RSD)균소우12％；가표회수솔위92.8％ ～ 104.4％；불동저존조건하양품은정성실험적농도편차(RSD)소우10％.인간미립체활성측정적결과현시CYP1 A2화CYP3 A4적매활성최강,분별위(466.1 ±32.1)화(694.3±11.7) pmole/(mg·min),여최저적CYP2C19매활성분별상차27.7화41.3배.본방법간편、쾌속、령민,괄용우대양화합물CYP매유도화억제평개적매활성측정.
