分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2013年
4期
473-480
,共8页
微泵%微流控微珠阵列%三磷酸腺苷双磷酸酶%基因突变%量子点
微泵%微流控微珠陣列%三燐痠腺苷雙燐痠酶%基因突變%量子點
미빙%미류공미주진렬%삼린산선감쌍린산매%기인돌변%양자점
建立了一种基于微泵集成微流控微珠阵列芯片及三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)介导的等位基因特异性延伸的基因突变检测方法.将微流控芯片、引物修饰微珠阵列及基于毛细和蒸发作用的微流体驱动泵集成构建检测芯片,待测目标序列流过装配的微球阵列并与微球表面延伸引物杂交,在Apyrase和去除外切酶活性的Klenow DNA聚合酶协同作用下,引物3’末端碱基与目标序列包含的基因突变检测位点匹配则能够发生延伸,并将生物素化的dCTP掺入到引物的延伸序列中并固定在微球表面,链霉亲和素修饰量子点能与微球表面引物延伸序列中的生物素结合并提供荧光信号,而引物3 '末端与目标序列存在单碱基不匹配则不能发生延伸.结果表明:采用这种单碱基识别技术,微泵驱动的芯片内可以检测0.2 pmol/L目标序列(信背比＞3),液压驱动的芯片内能识别0.5 pmol/L目标序列,而芯片外检测只能识别0.1 nmol/L目标序列,微泵集成芯片在检测基因突变时其灵敏度较芯片外基因突变分析提高了500倍,并在0.5～ 30 pmol/L目标序列浓度范围内待测序列浓度与检测信号呈良好的线性关系.测定了一个人基因组样本中多药耐药蛋白基因1(MDR1)的两个多态性位点C3435T及G2677T,结果显示该样本具有3435CT及2677TT的基因型组合,此结果与DNA测序结果一致.本方法用于基因突变分析,具有良好的特异性、灵敏性及稳定性.
建立瞭一種基于微泵集成微流控微珠陣列芯片及三燐痠腺苷雙燐痠酶(Apyrase)介導的等位基因特異性延伸的基因突變檢測方法.將微流控芯片、引物脩飾微珠陣列及基于毛細和蒸髮作用的微流體驅動泵集成構建檢測芯片,待測目標序列流過裝配的微毬陣列併與微毬錶麵延伸引物雜交,在Apyrase和去除外切酶活性的Klenow DNA聚閤酶協同作用下,引物3’末耑堿基與目標序列包含的基因突變檢測位點匹配則能夠髮生延伸,併將生物素化的dCTP摻入到引物的延伸序列中併固定在微毬錶麵,鏈黴親和素脩飾量子點能與微毬錶麵引物延伸序列中的生物素結閤併提供熒光信號,而引物3 '末耑與目標序列存在單堿基不匹配則不能髮生延伸.結果錶明:採用這種單堿基識彆技術,微泵驅動的芯片內可以檢測0.2 pmol/L目標序列(信揹比＞3),液壓驅動的芯片內能識彆0.5 pmol/L目標序列,而芯片外檢測隻能識彆0.1 nmol/L目標序列,微泵集成芯片在檢測基因突變時其靈敏度較芯片外基因突變分析提高瞭500倍,併在0.5～ 30 pmol/L目標序列濃度範圍內待測序列濃度與檢測信號呈良好的線性關繫.測定瞭一箇人基因組樣本中多藥耐藥蛋白基因1(MDR1)的兩箇多態性位點C3435T及G2677T,結果顯示該樣本具有3435CT及2677TT的基因型組閤,此結果與DNA測序結果一緻.本方法用于基因突變分析,具有良好的特異性、靈敏性及穩定性.
건립료일충기우미빙집성미류공미주진렬심편급삼린산선감쌍린산매(Apyrase)개도적등위기인특이성연신적기인돌변검측방법.장미류공심편、인물수식미주진렬급기우모세화증발작용적미류체구동빙집성구건검측심편,대측목표서렬류과장배적미구진렬병여미구표면연신인물잡교,재Apyrase화거제외절매활성적Klenow DNA취합매협동작용하,인물3’말단감기여목표서렬포함적기인돌변검측위점필배칙능구발생연신,병장생물소화적dCTP참입도인물적연신서렬중병고정재미구표면,련매친화소수식양자점능여미구표면인물연신서렬중적생물소결합병제공형광신호,이인물3 '말단여목표서렬존재단감기불필배칙불능발생연신.결과표명:채용저충단감기식별기술,미빙구동적심편내가이검측0.2 pmol/L목표서렬(신배비＞3),액압구동적심편내능식별0.5 pmol/L목표서렬,이심편외검측지능식별0.1 nmol/L목표서렬,미빙집성심편재검측기인돌변시기령민도교심편외기인돌변분석제고료500배,병재0.5～ 30 pmol/L목표서렬농도범위내대측서렬농도여검측신호정량호적선성관계.측정료일개인기인조양본중다약내약단백기인1(MDR1)적량개다태성위점C3435T급G2677T,결과현시해양본구유3435CT급2677TT적기인형조합,차결과여DNA측서결과일치.본방법용우기인돌변분석,구유량호적특이성、령민성급은정성.
