CAJ | 학술논문

目的：构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的干涉缺氧诱导因子（HIF）-2α表达的慢病毒载体，并对所得产物进行鉴定。方法体外合成的单链HIF-2α干涉片段经过退火后形成的双链片段和以质粒 PCDH为模板扩增出的EF1-EGFP 均与PLKO．1-puro连接，形成重组的慢病毒载体质粒PLKO．1-shHIF-2α，后者与pMD2G，pSAX2共转染293 FT细胞中进行包装，产生重组慢病毒颗粒。用其感染786-0细胞，检测细胞中GFP表达情况。结果成功扩增出干涉HIF-2α片段和EF1-EGFP片段，酶切鉴定及测序均证实PLKO．1-shHIF-2α质粒构建成功。转染293FT细胞产生的重组慢病毒颗粒感染786-0细胞后高表达绿色荧光。结论成功构建了高效的带GFP报告基因并稳定干涉HIF-2α表达的慢病毒载体。
목적：구건록색형광단백（GFP）표기적간섭결양유도인자（HIF）-2α표체적만병독재체，병대소득산물진행감정。방법체외합성적단련HIF-2α간섭편단경과퇴화후형성적쌍련편단화이질립 PCDH위모판확증출적EF1-EGFP 균여PLKO．1-puro련접，형성중조적만병독재체질립PLKO．1-shHIF-2α，후자여pMD2G，pSAX2공전염293 FT세포중진행포장，산생중조만병독과립。용기감염786-0세포，검측세포중GFP표체정황。결과성공확증출간섭HIF-2α편단화EF1-EGFP편단，매절감정급측서균증실PLKO．1-shHIF-2α질립구건성공。전염293FT세포산생적중조만병독과립감염786-0세포후고표체록색형광。결론성공구건료고효적대GFP보고기인병은정간섭HIF-2α표체적만병독재체。