分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2012年
5期
745-751
,共7页
任海涛%沈玉栋%徐振林%杨金易%雷红涛%肖治理%王弘%孙远明
任海濤%瀋玉棟%徐振林%楊金易%雷紅濤%肖治理%王弘%孫遠明
임해도%침옥동%서진림%양금역%뢰홍도%초치리%왕홍%손원명
呋喃唑酮%单克隆抗体%酶联免疫法%异源包被
呋喃唑酮%單剋隆抗體%酶聯免疫法%異源包被
부남서동%단극륭항체%매련면역법%이원포피
本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68× 1010L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1％)抗AOZ单克隆抗体.同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响.另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5 -OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(deELISA)检测方法.结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503 μg/L,定量检测线性范围(IC20～IG80)为0.06～14.0 μg/L,检出限(IC10)达0.017 μg/L; dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19 μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6 μg/L,检出限为0.056 μg/L.两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测.
本研究針對呋喃唑酮代謝物(AOZ),設計閤成瞭繫列半抗原,進一步通過偶聯牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、細胞融閤、篩選和亞剋隆等過程成功穫得瞭源于新穎半抗原H3的具有高親和力(親和力常數6.68× 1010L/mol)和高特異性(與其它功能類似物交扠反應小于0.1％)抗AOZ單剋隆抗體.同時,基于設計閤成的繫列同/異源半抗原/包被抗原,攷察瞭不同結構包被原對ELISA方法靈敏度的影響.另外,採用最佳的特徵結構異源包被原H5 -OVA,建立瞭以對硝基苯甲醛(p-NP)為衍生劑的AOZ間接競爭ELISA(icELISA)和直接競爭ELISA(deELISA)檢測方法.結果錶明:icELISA模式的AOZ檢測IC50為0.503 μg/L,定量檢測線性範圍(IC20～IG80)為0.06～14.0 μg/L,檢齣限(IC10)達0.017 μg/L; dcELISA模式的AOZ檢測IC50為1.19 μg/L,定量檢測線性範圍為0.14～23.6 μg/L,檢齣限為0.056 μg/L.兩種方法對AOZ的檢測靈敏度和定量線性範圍均達到相關檢測限量要求,可滿足不同需求的實際樣品檢測.
본연구침대부남서동대사물(AOZ),설계합성료계렬반항원,진일보통과우련우혈청백단백(BSA)면역Balb/c소서、세포융합、사선화아극륭등과정성공획득료원우신영반항원H3적구유고친화력(친화력상수6.68× 1010L/mol)화고특이성(여기타공능유사물교차반응소우0.1％)항AOZ단극륭항체.동시,기우설계합성적계렬동/이원반항원/포피항원,고찰료불동결구포피원대ELISA방법령민도적영향.령외,채용최가적특정결구이원포피원H5 -OVA,건립료이대초기분갑철(p-NP)위연생제적AOZ간접경쟁ELISA(icELISA)화직접경쟁ELISA(deELISA)검측방법.결과표명:icELISA모식적AOZ검측IC50위0.503 μg/L,정량검측선성범위(IC20～IG80)위0.06～14.0 μg/L,검출한(IC10)체0.017 μg/L; dcELISA모식적AOZ검측IC50위1.19 μg/L,정량검측선성범위위0.14～23.6 μg/L,검출한위0.056 μg/L.량충방법대AOZ적검측령민도화정량선성범위균체도상관검측한량요구,가만족불동수구적실제양품검측.
