山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
15期
1-3
,共3页
人类疱疹病毒%人类疱疹病毒8型基因%质粒标准品%实时荧光定量PCR%卡波西肉瘤
人類皰疹病毒%人類皰疹病毒8型基因%質粒標準品%實時熒光定量PCR%卡波西肉瘤
인류포진병독%인류포진병독8형기인%질립표준품%실시형광정량PCR%잡파서육류
目的 构建人类疱疹病毒8型(HHV-8)基因质粒标准品,以便快速、灵敏、可靠地检测与HHV-8相关疾病患者的病毒载量.方法 提取HHV-8基因组DNA,以HHV-8 ORF26为目的基因设计引物,进行PCR扩增；纯化目的片段与pMD19-T Vector连接并转化到大肠杆菌中；提取重组质粒DNA,并行PCR、测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,实时荧光定量PCR(Real-time FQ-PCR)构建标准曲线.结果 HHV-8 ORF26目的片段制备成功,获得稳定的重组质粒,保证了目的片段的特异性和序列完整性,标准曲线参数良好,外标准品阈值循环数(Ct)与其相应梯度稀释浓度呈良好的线性关系,扩增效率高.结论 成功构建了HHV-8的Real-time FQ-PCR外标准品,可以快速检测样品中的HHV-8载量.
目的 構建人類皰疹病毒8型(HHV-8)基因質粒標準品,以便快速、靈敏、可靠地檢測與HHV-8相關疾病患者的病毒載量.方法 提取HHV-8基因組DNA,以HHV-8 ORF26為目的基因設計引物,進行PCR擴增；純化目的片段與pMD19-T Vector連接併轉化到大腸桿菌中；提取重組質粒DNA,併行PCR、測序鑒定,計算重組質粒原液拷貝數濃度併製備梯度濃度標準品,實時熒光定量PCR(Real-time FQ-PCR)構建標準麯線.結果 HHV-8 ORF26目的片段製備成功,穫得穩定的重組質粒,保證瞭目的片段的特異性和序列完整性,標準麯線參數良好,外標準品閾值循環數(Ct)與其相應梯度稀釋濃度呈良好的線性關繫,擴增效率高.結論 成功構建瞭HHV-8的Real-time FQ-PCR外標準品,可以快速檢測樣品中的HHV-8載量.
목적 구건인류포진병독8형(HHV-8)기인질립표준품,이편쾌속、령민、가고지검측여HHV-8상관질병환자적병독재량.방법 제취HHV-8기인조DNA,이HHV-8 ORF26위목적기인설계인물,진행PCR확증；순화목적편단여pMD19-T Vector련접병전화도대장간균중；제취중조질립DNA,병행PCR、측서감정,계산중조질립원액고패수농도병제비제도농도표준품,실시형광정량PCR(Real-time FQ-PCR)구건표준곡선.결과 HHV-8 ORF26목적편단제비성공,획득은정적중조질립,보증료목적편단적특이성화서렬완정성,표준곡선삼수량호,외표준품역치순배수(Ct)여기상응제도희석농도정량호적선성관계,확증효솔고.결론 성공구건료HHV-8적Real-time FQ-PCR외표준품,가이쾌속검측양품중적HHV-8재량.
