分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2013年
11期
1653-1658
,共6页
李子健%何鑫%潘晨宇%刘宁
李子健%何鑫%潘晨宇%劉寧
리자건%하흠%반신우%류저
质谱%14-3-3ε蛋白%磷酸化修饰
質譜%14-3-3ε蛋白%燐痠化脩飾
질보%14-3-3ε단백%린산화수식
Mass spectrometry%14-3-3ε protein%Phosphorylation
本研究在HEK293细胞中过表达带有6个组氨酸标签的14-3-3ε蛋白,经镍离子亲和树脂富集和凝胶电泳等生物化学方法分离并富集目标14-3-3ε蛋白.利用特异性胰蛋白酶对14-3-3ε蛋白进行胶内水解后,采用TiO2亲和层析法,对蛋白水解混合物中的磷酸化修饰肽段进行富集,并利用生物质谱技术分析鉴定了14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰位点.结果表明,利用生物质谱技术,结合人工解谱的方法,能够高效、准确地鉴定HEK293细胞中过表达的14-3-3ε蛋白中的磷酸化修饰肽段的结构信息,确定了14-3-3,ε蛋白中的12个磷酸化修饰位点,其中多个位点的磷酸化修饰为首次发现.
本研究在HEK293細胞中過錶達帶有6箇組氨痠標籤的14-3-3ε蛋白,經鎳離子親和樹脂富集和凝膠電泳等生物化學方法分離併富集目標14-3-3ε蛋白.利用特異性胰蛋白酶對14-3-3ε蛋白進行膠內水解後,採用TiO2親和層析法,對蛋白水解混閤物中的燐痠化脩飾肽段進行富集,併利用生物質譜技術分析鑒定瞭14-3-3ε蛋白中的燐痠化脩飾位點.結果錶明,利用生物質譜技術,結閤人工解譜的方法,能夠高效、準確地鑒定HEK293細胞中過錶達的14-3-3ε蛋白中的燐痠化脩飾肽段的結構信息,確定瞭14-3-3,ε蛋白中的12箇燐痠化脩飾位點,其中多箇位點的燐痠化脩飾為首次髮現.
본연구재HEK293세포중과표체대유6개조안산표첨적14-3-3ε단백,경얼리자친화수지부집화응효전영등생물화학방법분리병부집목표14-3-3ε단백.이용특이성이단백매대14-3-3ε단백진행효내수해후,채용TiO2친화층석법,대단백수해혼합물중적린산화수식태단진행부집,병이용생물질보기술분석감정료14-3-3ε단백중적린산화수식위점.결과표명,이용생물질보기술,결합인공해보적방법,능구고효、준학지감정HEK293세포중과표체적14-3-3ε단백중적린산화수식태단적결구신식,학정료14-3-3,ε단백중적12개린산화수식위점,기중다개위점적린산화수식위수차발현.
