遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2005年
6期
953-958
,共6页
基因打靶载体构建%Red/ET重组%基因敲除
基因打靶載體構建%Red/ET重組%基因敲除
기인타파재체구건%Red/ET중조%기인고제
通过合理应用Red/ET重组技术实现基因打靶载体的快速构建.在Red/ET重组介导下,首先从基因组DNA中将靶基因片段亚克隆至打靶质粒载体中,随后将两端带有50 bp同源臂的抗性筛选基因插入并替换靶基因上的目标序列,如此两步操作即可完成一个传统型基因敲除打靶载体的构建;结合Cre-IoxP系统,在传统型基因敲除打靶载体的基础上,经过再一轮的Red/ET重组就能够成功实现条件性基因敲除打靶载体的构建.整个实验过程不需要PCR扩增长、短臂序列,也不涉及酶切、连接反应,因此,不仅省时、省力,而且所构建的基因打靶载体序列准确,无突变.实验方法的建立为加速后基因组时代的基因功能研究提供了一条捷径.
通過閤理應用Red/ET重組技術實現基因打靶載體的快速構建.在Red/ET重組介導下,首先從基因組DNA中將靶基因片段亞剋隆至打靶質粒載體中,隨後將兩耑帶有50 bp同源臂的抗性篩選基因插入併替換靶基因上的目標序列,如此兩步操作即可完成一箇傳統型基因敲除打靶載體的構建;結閤Cre-IoxP繫統,在傳統型基因敲除打靶載體的基礎上,經過再一輪的Red/ET重組就能夠成功實現條件性基因敲除打靶載體的構建.整箇實驗過程不需要PCR擴增長、短臂序列,也不涉及酶切、連接反應,因此,不僅省時、省力,而且所構建的基因打靶載體序列準確,無突變.實驗方法的建立為加速後基因組時代的基因功能研究提供瞭一條捷徑.
통과합리응용Red/ET중조기술실현기인타파재체적쾌속구건.재Red/ET중조개도하,수선종기인조DNA중장파기인편단아극륭지타파질립재체중,수후장량단대유50 bp동원비적항성사선기인삽입병체환파기인상적목표서렬,여차량보조작즉가완성일개전통형기인고제타파재체적구건;결합Cre-IoxP계통,재전통형기인고제타파재체적기출상,경과재일륜적Red/ET중조취능구성공실현조건성기인고제타파재체적구건.정개실험과정불수요PCR확증장、단비서렬,야불섭급매절、련접반응,인차,불부성시、성력,이차소구건적기인타파재체서렬준학,무돌변.실험방법적건립위가속후기인조시대적기인공능연구제공료일조첩경.
