分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2015年
4期
582-587
,共6页
晋学飞%孔祥波%张丹%刘婷婷%王凯臣
晉學飛%孔祥波%張丹%劉婷婷%王凱臣
진학비%공상파%장단%류정정%왕개신
膀胱癌生物标志物%基质金属蛋白酶%分子探针筛选%明胶酶谱
膀胱癌生物標誌物%基質金屬蛋白酶%分子探針篩選%明膠酶譜
방광암생물표지물%기질금속단백매%분자탐침사선%명효매보
Bladder cancer biomarker%Matrix metalloproteinase%Probe screen%Gelatin zymography
通过分离人胚胎肾细胞(HEK293)中基质金属蛋白酶1(MMPl)基因序列,利用基因工程技术在大肠杆菌中表达并纯化了包涵体复性的MMP1;采用融合表达硫氧还蛋白(Thioredoxin,TrxA)的方法获得了可溶性的MMPl-TrxA复合蛋白,在TrxA蛋白和MMP1活性中心之间引入了一个肠激酶切割位点,通过酶切作用获得可溶性MMP1.明胶酶谱分析法对体外表达的MMP1和体内(尿液中)MMP1进行了分析比较.结果表明,TrxA蛋白能够显著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明胶降解活性是复性的MMP1降解活性的1.54倍,与尿液中的MMP1的明胶酶降解活性相当.因此,明胶酶谱法是一种有效的、高灵敏的MMP1检测方法,所表达的可溶性MMP1为小分子探针筛选提供了更可靠的分子靶点.
通過分離人胚胎腎細胞(HEK293)中基質金屬蛋白酶1(MMPl)基因序列,利用基因工程技術在大腸桿菌中錶達併純化瞭包涵體複性的MMP1;採用融閤錶達硫氧還蛋白(Thioredoxin,TrxA)的方法穫得瞭可溶性的MMPl-TrxA複閤蛋白,在TrxA蛋白和MMP1活性中心之間引入瞭一箇腸激酶切割位點,通過酶切作用穫得可溶性MMP1.明膠酶譜分析法對體外錶達的MMP1和體內(尿液中)MMP1進行瞭分析比較.結果錶明,TrxA蛋白能夠顯著提高MMP1的可溶性,且可溶性MMP1的明膠降解活性是複性的MMP1降解活性的1.54倍,與尿液中的MMP1的明膠酶降解活性相噹.因此,明膠酶譜法是一種有效的、高靈敏的MMP1檢測方法,所錶達的可溶性MMP1為小分子探針篩選提供瞭更可靠的分子靶點.
통과분리인배태신세포(HEK293)중기질금속단백매1(MMPl)기인서렬,이용기인공정기술재대장간균중표체병순화료포함체복성적MMP1;채용융합표체류양환단백(Thioredoxin,TrxA)적방법획득료가용성적MMPl-TrxA복합단백,재TrxA단백화MMP1활성중심지간인입료일개장격매절할위점,통과매절작용획득가용성MMP1.명효매보분석법대체외표체적MMP1화체내(뇨액중)MMP1진행료분석비교.결과표명,TrxA단백능구현저제고MMP1적가용성,차가용성MMP1적명효강해활성시복성적MMP1강해활성적1.54배,여뇨액중적MMP1적명효매강해활성상당.인차,명효매보법시일충유효적、고령민적MMP1검측방법,소표체적가용성MMP1위소분자탐침사선제공료경가고적분자파점.
