分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2015年
5期
689-696
,共8页
林江慧%张建伟%肖晓毛%高建平%张惠芳%魏峥
林江慧%張建偉%肖曉毛%高建平%張惠芳%魏崢
림강혜%장건위%초효모%고건평%장혜방%위쟁
肝素寡糖%飞行时间质谱%肝素酶%序列测定
肝素寡糖%飛行時間質譜%肝素酶%序列測定
간소과당%비행시간질보%간소매%서렬측정
Heparin oligosaccharide%Time-of-flight mass spectrometry%Heparinase%Sequence analysis
建立了含N-乙酰化肝素寡糖的分离提纯及其序列结构分析方法.首先应用肝素酶Ⅰ深度酶解低分子量肝素来富集含N-乙酰化结构寡糖,通过Bio-Gel P10凝胶色谱法分离制备了包括二糖至十四糖的系列肝素寡糖粗样品,ProPac PA-1强阴离子高效液相色谱(SAX-HPLC)等方法对粗样品进一步分离,提纯得到4种六糖和3种八糖片段.其次应用肝素酶Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ复合酶解与HPLC法分析各纯化寡糖的二糖组分,并结合肝素酶Ⅰ底物特异性,初步推断4种六糖和3种八糖的序列结构.在寡糖的糖链两端均含有N-硫酸化二糖,而N-乙酰化二糖分布在糖链当中.应用电喷雾离子阱-飞行时间质谱(ESI-IT-TOF-MS)在负离子模式下进一步表征寡糖并分析其裂解规律.结果表明,各寡糖中均出现大量因SO32-丢失形成的碎片离子峰,六糖中主要有双电荷和三电荷碎片离子峰;在八糖中出现了一系列从双电荷至五电荷的离子峰.各寡糖的双电荷离子峰质荷比进一步确定了上述寡糖的序列结构.六糖的裂解规律表明,裂解主要存在于糖苷键,N-乙酰葡糖胺和糖醛酸上的裂解方式分别为0,2X和0,2Z.本研究提供了切实有效的分离、分析未知结构肝素寡糖序列的新方法.
建立瞭含N-乙酰化肝素寡糖的分離提純及其序列結構分析方法.首先應用肝素酶Ⅰ深度酶解低分子量肝素來富集含N-乙酰化結構寡糖,通過Bio-Gel P10凝膠色譜法分離製備瞭包括二糖至十四糖的繫列肝素寡糖粗樣品,ProPac PA-1彊陰離子高效液相色譜(SAX-HPLC)等方法對粗樣品進一步分離,提純得到4種六糖和3種八糖片段.其次應用肝素酶Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ複閤酶解與HPLC法分析各純化寡糖的二糖組分,併結閤肝素酶Ⅰ底物特異性,初步推斷4種六糖和3種八糖的序列結構.在寡糖的糖鏈兩耑均含有N-硫痠化二糖,而N-乙酰化二糖分佈在糖鏈噹中.應用電噴霧離子阱-飛行時間質譜(ESI-IT-TOF-MS)在負離子模式下進一步錶徵寡糖併分析其裂解規律.結果錶明,各寡糖中均齣現大量因SO32-丟失形成的碎片離子峰,六糖中主要有雙電荷和三電荷碎片離子峰;在八糖中齣現瞭一繫列從雙電荷至五電荷的離子峰.各寡糖的雙電荷離子峰質荷比進一步確定瞭上述寡糖的序列結構.六糖的裂解規律錶明,裂解主要存在于糖苷鍵,N-乙酰葡糖胺和糖醛痠上的裂解方式分彆為0,2X和0,2Z.本研究提供瞭切實有效的分離、分析未知結構肝素寡糖序列的新方法.
건립료함N-을선화간소과당적분리제순급기서렬결구분석방법.수선응용간소매Ⅰ심도매해저분자량간소래부집함N-을선화결구과당,통과Bio-Gel P10응효색보법분리제비료포괄이당지십사당적계렬간소과당조양품,ProPac PA-1강음리자고효액상색보(SAX-HPLC)등방법대조양품진일보분리,제순득도4충륙당화3충팔당편단.기차응용간소매Ⅰ,Ⅱ화Ⅲ복합매해여HPLC법분석각순화과당적이당조분,병결합간소매Ⅰ저물특이성,초보추단4충륙당화3충팔당적서렬결구.재과당적당련량단균함유N-류산화이당,이N-을선화이당분포재당련당중.응용전분무리자정-비행시간질보(ESI-IT-TOF-MS)재부리자모식하진일보표정과당병분석기렬해규률.결과표명,각과당중균출현대량인SO32-주실형성적쇄편리자봉,륙당중주요유쌍전하화삼전하쇄편리자봉;재팔당중출현료일계렬종쌍전하지오전하적리자봉.각과당적쌍전하리자봉질하비진일보학정료상술과당적서렬결구.륙당적렬해규률표명,렬해주요존재우당감건,N-을선포당알화당철산상적렬해방식분별위0,2X화0,2Z.본연구제공료절실유효적분리、분석미지결구간소과당서렬적신방법.
