遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
5期
589-593
,共5页
李伟%杨钧国%任法鑫%康彩练%张守焰
李偉%楊鈞國%任法鑫%康綵練%張守燄
리위%양균국%임법흠%강채련%장수염
长QT综合征%KCNQ1%PCR%定点突变
長QT綜閤徵%KCNQ1%PCR%定點突變
장QT종합정%KCNQ1%PCR%정점돌변
利用聚合酶链反应(PCR)技术对长QT综合征(LQTS)KCNQ1基因进行定点突变的研究.首先设计两对引物(包含预定的突变),通过3轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段,然后将片段克隆入T载体中,通过酶切连接的方法将突变点引入到pIRES2-EGFP-KCNQ1中,随后用Effectene转染试剂介导转染HEK293细胞.结果在真核表达载体pIRES2-EGFP-KCNQ1基础上获得了KCNQ1 cDNA C934T的突变体,测序表明在序列中发生了预期的突变.将含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1转染HEK293细胞后,在荧光显微镜下观察到被转染的HEK293细胞发出绿色荧光,表明含突变点的pIRES2-EGFP-KCNQ1得到了表达.
利用聚閤酶鏈反應(PCR)技術對長QT綜閤徵(LQTS)KCNQ1基因進行定點突變的研究.首先設計兩對引物(包含預定的突變),通過3輪PCR擴增,擴增齣含有所需突變位點的片段,然後將片段剋隆入T載體中,通過酶切連接的方法將突變點引入到pIRES2-EGFP-KCNQ1中,隨後用Effectene轉染試劑介導轉染HEK293細胞.結果在真覈錶達載體pIRES2-EGFP-KCNQ1基礎上穫得瞭KCNQ1 cDNA C934T的突變體,測序錶明在序列中髮生瞭預期的突變.將含突變點的pIRES2-EGFP-KCNQ1轉染HEK293細胞後,在熒光顯微鏡下觀察到被轉染的HEK293細胞髮齣綠色熒光,錶明含突變點的pIRES2-EGFP-KCNQ1得到瞭錶達.
이용취합매련반응(PCR)기술대장QT종합정(LQTS)KCNQ1기인진행정점돌변적연구.수선설계량대인물(포함예정적돌변),통과3륜PCR확증,확증출함유소수돌변위점적편단,연후장편단극륭입T재체중,통과매절련접적방법장돌변점인입도pIRES2-EGFP-KCNQ1중,수후용Effectene전염시제개도전염HEK293세포.결과재진핵표체재체pIRES2-EGFP-KCNQ1기출상획득료KCNQ1 cDNA C934T적돌변체,측서표명재서렬중발생료예기적돌변.장함돌변점적pIRES2-EGFP-KCNQ1전염HEK293세포후,재형광현미경하관찰도피전염적HEK293세포발출록색형광,표명함돌변점적pIRES2-EGFP-KCNQ1득도료표체.
