分析化学
分析化學
분석화학
Chinese Journal of Analytical Chemistry
2015年
10期
1580-1588
,共9页
流动注射分析%过氧化物酶%萝卜提取液%愈创木酚%过氧化氢
流動註射分析%過氧化物酶%蘿蔔提取液%愈創木酚%過氧化氫
류동주사분석%과양화물매%라복제취액%유창목분%과양화경
Flow injection analysis%Peroxidase%Radish extracts%Guaiacol%Hydrogen peroxide
本研究给出了流动注射分光光度系统(FI-SP)测定酶活性浓度(昱c)的通用公式Ec=k△A/△t;△t是在酶促反应线性响应区域内试样塞的平均留存时间;△A为平均留存时间处对应的吸光度;k=nV/(εvL),V为样品注入点到流通池入口之间的管路总容积,n为酶底物与产物的反应摩尔比,ε为产物的摩尔吸收系数,v为注入的酶液体积,L为流通池光程;FI-SP系统确定后k为常数.在此基础上,将H2O2/过氧化物酶(POD)/愈创木酚(GA)反应体系导入FI-SP系统,建立了一种无需标准曲线的POD活性快速准确测定的新方法.此方法优化后的条件:载流磷酸盐缓冲液浓度为0.05 mol/L(pH 5.5),进样体积为40 μL,反应盘管长度200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCI(清洗液),检测波长470 nm,产物的摩尔吸光系数为0.0125 L(μ,mol·cm).本方法的重现性RSD＜0.38％ (n=11),分析速度为40样/h,测定范围为450-7260 U/L,检出限为89 U/L.在优化条件及60℃下,用本方法测定了多种白萝卜中POD活性,结果与动力学曲线法完全相同.
本研究給齣瞭流動註射分光光度繫統(FI-SP)測定酶活性濃度(昱c)的通用公式Ec=k△A/△t;△t是在酶促反應線性響應區域內試樣塞的平均留存時間;△A為平均留存時間處對應的吸光度;k=nV/(εvL),V為樣品註入點到流通池入口之間的管路總容積,n為酶底物與產物的反應摩爾比,ε為產物的摩爾吸收繫數,v為註入的酶液體積,L為流通池光程;FI-SP繫統確定後k為常數.在此基礎上,將H2O2/過氧化物酶(POD)/愈創木酚(GA)反應體繫導入FI-SP繫統,建立瞭一種無需標準麯線的POD活性快速準確測定的新方法.此方法優化後的條件:載流燐痠鹽緩遲液濃度為0.05 mol/L(pH 5.5),進樣體積為40 μL,反應盤管長度200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCI(清洗液),檢測波長470 nm,產物的摩爾吸光繫數為0.0125 L(μ,mol·cm).本方法的重現性RSD＜0.38％ (n=11),分析速度為40樣/h,測定範圍為450-7260 U/L,檢齣限為89 U/L.在優化條件及60℃下,用本方法測定瞭多種白蘿蔔中POD活性,結果與動力學麯線法完全相同.
본연구급출료류동주사분광광도계통(FI-SP)측정매활성농도(욱c)적통용공식Ec=k△A/△t;△t시재매촉반응선성향응구역내시양새적평균류존시간;△A위평균류존시간처대응적흡광도;k=nV/(εvL),V위양품주입점도류통지입구지간적관로총용적,n위매저물여산물적반응마이비,ε위산물적마이흡수계수,v위주입적매액체적,L위류통지광정;FI-SP계통학정후k위상수.재차기출상,장H2O2/과양화물매(POD)/유창목분(GA)반응체계도입FI-SP계통,건립료일충무수표준곡선적POD활성쾌속준학측정적신방법.차방법우화후적조건:재류린산염완충액농도위0.05 mol/L(pH 5.5),진양체적위40 μL,반응반관장도200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCI(청세액),검측파장470 nm,산물적마이흡광계수위0.0125 L(μ,mol·cm).본방법적중현성RSD＜0.38％ (n=11),분석속도위40양/h,측정범위위450-7260 U/L,검출한위89 U/L.재우화조건급60℃하,용본방법측정료다충백라복중POD활성,결과여동역학곡선법완전상동.
