山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
48期
18-20
,共3页
金炎%赵雪%刘晓雯%徐洁%王勇%赵跃然
金炎%趙雪%劉曉雯%徐潔%王勇%趙躍然
금염%조설%류효문%서길%왕용%조약연
杀伤细胞%真核表达%转染%基因重组
殺傷細胞%真覈錶達%轉染%基因重組
살상세포%진핵표체%전염%기인중조
目的 对人NKp30 (hNKp30)进行基因克隆并在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础.方法 提取人外周静脉血单个核细胞,分离纯化外周血总RNA.用PCR 扩增hNKp30片段,克隆至质粒载体pMD18-T,对克隆的DNA片段行序列分析.用限制酶XhoI、EcoRI消化pMD18-T-hNKp30 重组质粒,分离hNKp30片段,插入真核表达载体pIRES2-EGFP 相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pIRES2-EGFP-hNKp30,并转染COS-7细胞.结果 PCR扩增DNA片段与hNKp30 cDNA大小一致.重组质粒pMD18-T-hN Kp30 的DNA序列分析显示,克隆DNA 序列与文献报道hNKp30 的cDNA 序列一致.重组表达质粒pIRES2-EGFP-hNKp30转染COS-7细胞后,实现了hNKp30基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达.结论 采用重组技术成功构建了hNKp30真核表达载体,为探讨NK细胞受体的特性及其信号转导机制奠定了基础.
目的 對人NKp30 (hNKp30)進行基因剋隆併在大腸埃希菌中重組錶達,為進一步研究NK細胞抗腫瘤作用奠定基礎.方法 提取人外週靜脈血單箇覈細胞,分離純化外週血總RNA.用PCR 擴增hNKp30片段,剋隆至質粒載體pMD18-T,對剋隆的DNA片段行序列分析.用限製酶XhoI、EcoRI消化pMD18-T-hNKp30 重組質粒,分離hNKp30片段,插入真覈錶達載體pIRES2-EGFP 相應限製酶位點,酶譜分析鑒定重組錶達載體pIRES2-EGFP-hNKp30,併轉染COS-7細胞.結果 PCR擴增DNA片段與hNKp30 cDNA大小一緻.重組質粒pMD18-T-hN Kp30 的DNA序列分析顯示,剋隆DNA 序列與文獻報道hNKp30 的cDNA 序列一緻.重組錶達質粒pIRES2-EGFP-hNKp30轉染COS-7細胞後,實現瞭hNKp30基因在COS-7細胞中的體外轉染及瞬時錶達.結論 採用重組技術成功構建瞭hNKp30真覈錶達載體,為探討NK細胞受體的特性及其信號轉導機製奠定瞭基礎.
목적 대인NKp30 (hNKp30)진행기인극륭병재대장애희균중중조표체,위진일보연구NK세포항종류작용전정기출.방법 제취인외주정맥혈단개핵세포,분리순화외주혈총RNA.용PCR 확증hNKp30편단,극륭지질립재체pMD18-T,대극륭적DNA편단행서렬분석.용한제매XhoI、EcoRI소화pMD18-T-hNKp30 중조질립,분리hNKp30편단,삽입진핵표체재체pIRES2-EGFP 상응한제매위점,매보분석감정중조표체재체pIRES2-EGFP-hNKp30,병전염COS-7세포.결과 PCR확증DNA편단여hNKp30 cDNA대소일치.중조질립pMD18-T-hN Kp30 적DNA서렬분석현시,극륭DNA 서렬여문헌보도hNKp30 적cDNA 서렬일치.중조표체질립pIRES2-EGFP-hNKp30전염COS-7세포후,실현료hNKp30기인재COS-7세포중적체외전염급순시표체.결론 채용중조기술성공구건료hNKp30진핵표체재체,위탐토NK세포수체적특성급기신호전도궤제전정료기출.
