CAJ | 학술논문

外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节.实验以标记的DNA片段为示踪材料,就精子与外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行了研究.结果表明:山羊精子可自发性结合外源DNA,外源DNA最初结合于顶体后区质膜外表面,随后部分内化进入细胞内.精子对外源DNA的结合和内化能力随供体的不同而差异明显,在实验所检查的35只公羊中,结合率(DNaseⅠ消化前)波动于4.6%～62.4%,内化率(DNaseⅠ消化后)波动于2.1%～53.8%,个体间差异显著(P<0.01).对于同一供体的精子而言,阻止DNA结合的最主要因素是精浆,与射出的原精液相比,洗涤后精子的结合率和内化率分别提高了3倍和5倍;其次精子获能也将导致结合率和内化率降低(P<0.01).死精子不能完成外源DNA的内化过程,但反复冻融导致质膜破裂的死精子具有更高的结合率,而且阳性率与动物个体无关.上述结果提示,筛选合适的精子供体,采用优化的转染处理方法是提高精子载体方法效率的前提和保证.
외원DNA여정자상호작용후적정위급내화솔시정자재체법제비전기인동물적관건배절.실험이표기적DNA편단위시종재료,취정자여외원DNA상호작용적기본특정급영향인소진행료연구.결과표명:산양정자가자발성결합외원DNA,외원DNA최초결합우정체후구질막외표면,수후부분내화진입세포내.정자대외원DNA적결합화내화능력수공체적불동이차이명현,재실험소검사적35지공양중,결합솔(DNaseⅠ소화전)파동우4.6%～62.4%,내화솔(DNaseⅠ소화후)파동우2.1%～53.8%,개체간차이현저(P<0.01).대우동일공체적정자이언,조지DNA결합적최주요인소시정장,여사출적원정액상비,세조후정자적결합솔화내화솔분별제고료3배화5배;기차정자획능야장도치결합솔화내화솔강저(P<0.01).사정자불능완성외원DNA적내화과정,단반복동융도치질막파렬적사정자구유경고적결합솔,이차양성솔여동물개체무관.상술결과제시,사선합괄적정자공체,채용우화적전염처리방법시제고정자재체방법효솔적전제화보증.