中外健康文摘
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중외건강문적
WORLD HEALTH DIGEST
2012年
19期
53-56
,共4页
神经干细胞%慢病毒载体%转基因%绿色荧光蛋白
神經榦細胞%慢病毒載體%轉基因%綠色熒光蛋白
신경간세포%만병독재체%전기인%록색형광단백
目的 探讨以慢病毒(Lentivirus,LV)为载体,转染绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因至神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)的方法,观察其转染效率.方法 应用包装细胞293T将三种质粒载体pGC-E1-GFP、pHelper1.0 和pHelper2.0经脂质体转染重组,构建成表达GFP的慢病毒载体(Lentiviral vector-GFP,LV-GFP).并从孕14天大鼠胚胎的脑组织分离出神经干细胞,采用无血清培养法,进行体外培养、扩增.取经过5次传代神经干细胞,以1×105个细胞/500μl/孔接种于24孔板,分别按复感染指数(Multiplicities of infection,MOIs值)为0、1、5、10、15、20加入LV-GFP稀释液100μl,每一滴度加六孔,共六组.48～72小时后于倒置荧光显微镜下观察各组GFP的表达效率,并在72小时后进行神经干细胞球进行计数,以观LV-GFP对NSCs增殖的影响.并行流式细胞仪检测,得出各组NSCs的 GFP阳性转染率.结果 除MOI值为0的对照组外,48～72小时后各孔均有GFP表达.MOI值从0增至10,细胞的阳性表达率逐渐提高(P<0.05),MOI值为10的组能获得>90%的转染率.但MOI值从10增至20,形成的神经干细胞球数目却逐渐减少(P<0.05).结论 LV是将目的 基因转入NSCs的理想载体.以MOI为10的滴度,LV可将GFP基因高效转入神经干细胞内并表达.
目的 探討以慢病毒(Lentivirus,LV)為載體,轉染綠色熒光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因至神經榦細胞(Neural stem cells,NSCs)的方法,觀察其轉染效率.方法 應用包裝細胞293T將三種質粒載體pGC-E1-GFP、pHelper1.0 和pHelper2.0經脂質體轉染重組,構建成錶達GFP的慢病毒載體(Lentiviral vector-GFP,LV-GFP).併從孕14天大鼠胚胎的腦組織分離齣神經榦細胞,採用無血清培養法,進行體外培養、擴增.取經過5次傳代神經榦細胞,以1×105箇細胞/500μl/孔接種于24孔闆,分彆按複感染指數(Multiplicities of infection,MOIs值)為0、1、5、10、15、20加入LV-GFP稀釋液100μl,每一滴度加六孔,共六組.48～72小時後于倒置熒光顯微鏡下觀察各組GFP的錶達效率,併在72小時後進行神經榦細胞毬進行計數,以觀LV-GFP對NSCs增殖的影響.併行流式細胞儀檢測,得齣各組NSCs的 GFP暘性轉染率.結果 除MOI值為0的對照組外,48～72小時後各孔均有GFP錶達.MOI值從0增至10,細胞的暘性錶達率逐漸提高(P<0.05),MOI值為10的組能穫得>90%的轉染率.但MOI值從10增至20,形成的神經榦細胞毬數目卻逐漸減少(P<0.05).結論 LV是將目的 基因轉入NSCs的理想載體.以MOI為10的滴度,LV可將GFP基因高效轉入神經榦細胞內併錶達.
목적 탐토이만병독(Lentivirus,LV)위재체,전염록색형광단백(Green fluorescence protein,GFP)기인지신경간세포(Neural stem cells,NSCs)적방법,관찰기전염효솔.방법 응용포장세포293T장삼충질립재체pGC-E1-GFP、pHelper1.0 화pHelper2.0경지질체전염중조,구건성표체GFP적만병독재체(Lentiviral vector-GFP,LV-GFP).병종잉14천대서배태적뇌조직분리출신경간세포,채용무혈청배양법,진행체외배양、확증.취경과5차전대신경간세포,이1×105개세포/500μl/공접충우24공판,분별안복감염지수(Multiplicities of infection,MOIs치)위0、1、5、10、15、20가입LV-GFP희석액100μl,매일적도가륙공,공륙조.48～72소시후우도치형광현미경하관찰각조GFP적표체효솔,병재72소시후진행신경간세포구진행계수,이관LV-GFP대NSCs증식적영향.병행류식세포의검측,득출각조NSCs적 GFP양성전염솔.결과 제MOI치위0적대조조외,48～72소시후각공균유GFP표체.MOI치종0증지10,세포적양성표체솔축점제고(P<0.05),MOI치위10적조능획득>90%적전염솔.단MOI치종10증지20,형성적신경간세포구수목각축점감소(P<0.05).결론 LV시장목적 기인전입NSCs적이상재체.이MOI위10적적도,LV가장GFP기인고효전입신경간세포내병표체.
