遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2011年
9期
982-988
,共7页
刘伍限%贾斌%石国庆%任建功%刘卡%马润林
劉伍限%賈斌%石國慶%任建功%劉卡%馬潤林
류오한%가빈%석국경%임건공%류잡%마윤림
绵羊%FGF5%基因克隆%表达%RNAi
綿羊%FGF5%基因剋隆%錶達%RNAi
면양%FGF5%기인극륭%표체%RNAi
根据牛的成纤维细胞内生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因cDNA序列设计引物,PCR扩增得到绵羊FGF5基因cDNA的开放阅读框序列,并比较和其他6种高等哺乳动物的序列同源性；同时研究该基因在绵羊多种组织的表达情况,以及研究以细胞模型RNA干扰下的表达情况.结果表明,绵羊FGF5基因ORF全长为813 bp,编码270个氨基酸,分子量约为29.58 kDa,理论等电点10.59.绵羊FGF5基因cDNA序列与牛、人、小鼠、大鼠、犬和猫的对应序列同源性高度保守,预测氨基酸序列同源性同样具有高度保守性.RT-PCR分析表明FGF5在绵羊皮肤、小肠、肾脏、心脏、肝脏、脾脏、胰脏和肺中均有表达,皮肤中表达量最高.构建该基因的原核表达载体和RNAi载体,IPTG诱导在大肠杆菌中融合表达获得55 kDa的蛋白条带,设计的RNA干扰片段能显著抑制FGF5基因的表达.文章为进一步阐明绵羊FGF5的功能尤其是在羊毛生长发育中的作用提供了理论和实验基础.
根據牛的成纖維細胞內生長因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因cDNA序列設計引物,PCR擴增得到綿羊FGF5基因cDNA的開放閱讀框序列,併比較和其他6種高等哺乳動物的序列同源性；同時研究該基因在綿羊多種組織的錶達情況,以及研究以細胞模型RNA榦擾下的錶達情況.結果錶明,綿羊FGF5基因ORF全長為813 bp,編碼270箇氨基痠,分子量約為29.58 kDa,理論等電點10.59.綿羊FGF5基因cDNA序列與牛、人、小鼠、大鼠、犬和貓的對應序列同源性高度保守,預測氨基痠序列同源性同樣具有高度保守性.RT-PCR分析錶明FGF5在綿羊皮膚、小腸、腎髒、心髒、肝髒、脾髒、胰髒和肺中均有錶達,皮膚中錶達量最高.構建該基因的原覈錶達載體和RNAi載體,IPTG誘導在大腸桿菌中融閤錶達穫得55 kDa的蛋白條帶,設計的RNA榦擾片段能顯著抑製FGF5基因的錶達.文章為進一步闡明綿羊FGF5的功能尤其是在羊毛生長髮育中的作用提供瞭理論和實驗基礎.
근거우적성섬유세포내생장인자5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)기인cDNA서렬설계인물,PCR확증득도면양FGF5기인cDNA적개방열독광서렬,병비교화기타6충고등포유동물적서렬동원성；동시연구해기인재면양다충조직적표체정황,이급연구이세포모형RNA간우하적표체정황.결과표명,면양FGF5기인ORF전장위813 bp,편마270개안기산,분자량약위29.58 kDa,이론등전점10.59.면양FGF5기인cDNA서렬여우、인、소서、대서、견화묘적대응서렬동원성고도보수,예측안기산서렬동원성동양구유고도보수성.RT-PCR분석표명FGF5재면양피부、소장、신장、심장、간장、비장、이장화폐중균유표체,피부중표체량최고.구건해기인적원핵표체재체화RNAi재체,IPTG유도재대장간균중융합표체획득55 kDa적단백조대,설계적RNA간우편단능현저억제FGF5기인적표체.문장위진일보천명면양FGF5적공능우기시재양모생장발육중적작용제공료이론화실험기출.
