遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2009年
1期
36-42
,共7页
李若%田艳艳%高勇%王山%聂桓%李钰
李若%田豔豔%高勇%王山%聶桓%李鈺
리약%전염염%고용%왕산%섭환%리옥
RNAi%大转录本基因%LRP1B%HEK 293
RNAi%大轉錄本基因%LRP1B%HEK 293
RNAi%대전록본기인%LRP1B%HEK 293
低密度脂蛋白受体相关蛋白1B(Lipoprotein receptor-related protein 1 B,LRP1B)是脂蛋白受体家族庞大受体亚群的成员之一,LRP1B基因编码一个长达16.5 kb的大转录本.由于LRP1B的转录产物过大限制了其功能研究.为研究LRP1B基因与肿瘤转移的相关性,文章应用RNAi技术特异地封闭了LRP1B基因的表达.在设计siRNA过程中,根据高效siRNA序列特征和靶序列处的mRNA二级结构特点,对LRP1B基因多达1100个的siRNA候选靶序列进行双重评价,最终在基因转录本的不同位置选取了6个siRNA靶位点.针对这些靶位点,文章构建了6个表达shRNA的pSilencer4.1重组体,稳定转染HEK 293细胞并采用半定量RT-PCR检测各表达载体的沉默效果.结果表明,所构建的6个shRNA-pSilencer4.1重组体中有5个对LRP1B基因形成了有效沉默(>50%),并得到了多个完全封闭LRPIB基因表达的HEK 293细胞单克隆.
低密度脂蛋白受體相關蛋白1B(Lipoprotein receptor-related protein 1 B,LRP1B)是脂蛋白受體傢族龐大受體亞群的成員之一,LRP1B基因編碼一箇長達16.5 kb的大轉錄本.由于LRP1B的轉錄產物過大限製瞭其功能研究.為研究LRP1B基因與腫瘤轉移的相關性,文章應用RNAi技術特異地封閉瞭LRP1B基因的錶達.在設計siRNA過程中,根據高效siRNA序列特徵和靶序列處的mRNA二級結構特點,對LRP1B基因多達1100箇的siRNA候選靶序列進行雙重評價,最終在基因轉錄本的不同位置選取瞭6箇siRNA靶位點.針對這些靶位點,文章構建瞭6箇錶達shRNA的pSilencer4.1重組體,穩定轉染HEK 293細胞併採用半定量RT-PCR檢測各錶達載體的沉默效果.結果錶明,所構建的6箇shRNA-pSilencer4.1重組體中有5箇對LRP1B基因形成瞭有效沉默(>50%),併得到瞭多箇完全封閉LRPIB基因錶達的HEK 293細胞單剋隆.
저밀도지단백수체상관단백1B(Lipoprotein receptor-related protein 1 B,LRP1B)시지단백수체가족방대수체아군적성원지일,LRP1B기인편마일개장체16.5 kb적대전록본.유우LRP1B적전록산물과대한제료기공능연구.위연구LRP1B기인여종류전이적상관성,문장응용RNAi기술특이지봉폐료LRP1B기인적표체.재설계siRNA과정중,근거고효siRNA서렬특정화파서렬처적mRNA이급결구특점,대LRP1B기인다체1100개적siRNA후선파서렬진행쌍중평개,최종재기인전록본적불동위치선취료6개siRNA파위점.침대저사파위점,문장구건료6개표체shRNA적pSilencer4.1중조체,은정전염HEK 293세포병채용반정량RT-PCR검측각표체재체적침묵효과.결과표명,소구건적6개shRNA-pSilencer4.1중조체중유5개대LRP1B기인형성료유효침묵(>50%),병득도료다개완전봉폐LRPIB기인표체적HEK 293세포단극륭.
