遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2010年
8期
824-828
,共5页
孙雷%刘新雄%陈哲%张明%陆阳清%卓永光%符可鹏%樊祖茜
孫雷%劉新雄%陳哲%張明%陸暘清%卓永光%符可鵬%樊祖茜
손뢰%류신웅%진철%장명%륙양청%탁영광%부가붕%번조천
21号染色体%染色体微分离与微切割%DOP-PCR%染色体特异 DNA 文库
21號染色體%染色體微分離與微切割%DOP-PCR%染色體特異 DNA 文庫
21호염색체%염색체미분리여미절할%DOP-PCR%염색체특이 DNA 문고
为构建人类21号染色体特异DNA文库,以应用于人类遗传疾病的鉴定和研究,文章采用循环温度梯度法溶解释放微分高的人外周血细胞21号染色体DNA,将其进行简并寡核苷酸引物PCR(Degenerate oligo nucleotide primer-PCR,DOP-PCR)扩增后,利用100～500 bp和500～2 000 bp分段回收纯化的两种不同片段大小的DOP-PCR产物构建染色体特异DNA文库,并分别采用荧光原位杂交(Florescence in situ hybridization,FISH)和斑点杂交对DOP-PCR 产物的来源和随机取样的文库克隆进行检测以评估所构建DNA文库的特异性.结果表明:循环温度梯度法能有效溶解释放微分高的21号染色体DNA;通过对DOP-PCR产物的分段回收纯化和克隆,增加了大片段DNA的连接效率;利用FISH技术和斑点杂交双重鉴定实验证明了文库的特异性,从而构建了21号染色体特异的DNA文库,并建立了构建染色体特异DNA文库及检测其特异性的方法,为21号染色相关遗传疾病的鉴定和研究奠定了基础.
為構建人類21號染色體特異DNA文庫,以應用于人類遺傳疾病的鑒定和研究,文章採用循環溫度梯度法溶解釋放微分高的人外週血細胞21號染色體DNA,將其進行簡併寡覈苷痠引物PCR(Degenerate oligo nucleotide primer-PCR,DOP-PCR)擴增後,利用100～500 bp和500～2 000 bp分段迴收純化的兩種不同片段大小的DOP-PCR產物構建染色體特異DNA文庫,併分彆採用熒光原位雜交(Florescence in situ hybridization,FISH)和斑點雜交對DOP-PCR 產物的來源和隨機取樣的文庫剋隆進行檢測以評估所構建DNA文庫的特異性.結果錶明:循環溫度梯度法能有效溶解釋放微分高的21號染色體DNA;通過對DOP-PCR產物的分段迴收純化和剋隆,增加瞭大片段DNA的連接效率;利用FISH技術和斑點雜交雙重鑒定實驗證明瞭文庫的特異性,從而構建瞭21號染色體特異的DNA文庫,併建立瞭構建染色體特異DNA文庫及檢測其特異性的方法,為21號染色相關遺傳疾病的鑒定和研究奠定瞭基礎.
위구건인류21호염색체특이DNA문고,이응용우인류유전질병적감정화연구,문장채용순배온도제도법용해석방미분고적인외주혈세포21호염색체DNA,장기진행간병과핵감산인물PCR(Degenerate oligo nucleotide primer-PCR,DOP-PCR)확증후,이용100～500 bp화500～2 000 bp분단회수순화적량충불동편단대소적DOP-PCR산물구건염색체특이DNA문고,병분별채용형광원위잡교(Florescence in situ hybridization,FISH)화반점잡교대DOP-PCR 산물적래원화수궤취양적문고극륭진행검측이평고소구건DNA문고적특이성.결과표명:순배온도제도법능유효용해석방미분고적21호염색체DNA;통과대DOP-PCR산물적분단회수순화화극륭,증가료대편단DNA적련접효솔;이용FISH기술화반점잡교쌍중감정실험증명료문고적특이성,종이구건료21호염색체특이적DNA문고,병건립료구건염색체특이DNA문고급검측기특이성적방법,위21호염색상관유전질병적감정화연구전정료기출.
