遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
4期
451-454
,共4页
许文明%张思仲%邱为民%何国平%刘运强%马用信%孙岩
許文明%張思仲%邱為民%何國平%劉運彊%馬用信%孫巖
허문명%장사중%구위민%하국평%류운강%마용신%손암
znf230基因%绿色荧光蛋白%基因表达定位%Cos细胞
znf230基因%綠色熒光蛋白%基因錶達定位%Cos細胞
znf230기인%록색형광단백%기인표체정위%Cos세포
为了用绿色荧光蛋白标记观察人类无精症相关基因ZNF230在Cos7细胞中的蛋白质表达及定位,用PCR方法扩增得到突变的人和小鼠mt-ZNF230和mt-znf230基因,使其3′端的终止密码TGA突变为TGG,并装入T-载体,双酶切后通过定向克隆将其与真核表达载体pEGFP-N1的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因融合,构建了ZNF230-荧光蛋白融合基因表达载体.然后经真核表达质粒-脂质体介导,导入Cos7细胞系.荧光显微镜观察显示:在空白载体pEGFP-N1转染的Cos细胞中荧光布满整个细胞,而在转染阳性载体pEGFP-ZNF230和pEGFP-znf230的Cos细胞中荧光主要聚集在细胞核中.表明转染的Cos细胞系能高效表达人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF230基因表达的蛋白定位于细胞核内.
為瞭用綠色熒光蛋白標記觀察人類無精癥相關基因ZNF230在Cos7細胞中的蛋白質錶達及定位,用PCR方法擴增得到突變的人和小鼠mt-ZNF230和mt-znf230基因,使其3′耑的終止密碼TGA突變為TGG,併裝入T-載體,雙酶切後通過定嚮剋隆將其與真覈錶達載體pEGFP-N1的綠色熒光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因融閤,構建瞭ZNF230-熒光蛋白融閤基因錶達載體.然後經真覈錶達質粒-脂質體介導,導入Cos7細胞繫.熒光顯微鏡觀察顯示:在空白載體pEGFP-N1轉染的Cos細胞中熒光佈滿整箇細胞,而在轉染暘性載體pEGFP-ZNF230和pEGFP-znf230的Cos細胞中熒光主要聚集在細胞覈中.錶明轉染的Cos細胞繫能高效錶達人ZNF230和小鼠znf230蛋白,ZNF230基因錶達的蛋白定位于細胞覈內.
위료용록색형광단백표기관찰인류무정증상관기인ZNF230재Cos7세포중적단백질표체급정위,용PCR방법확증득도돌변적인화소서mt-ZNF230화mt-znf230기인,사기3′단적종지밀마TGA돌변위TGG,병장입T-재체,쌍매절후통과정향극륭장기여진핵표체재체pEGFP-N1적록색형광단백(green fluorescence protein,GFP)기인융합,구건료ZNF230-형광단백융합기인표체재체.연후경진핵표체질립-지질체개도,도입Cos7세포계.형광현미경관찰현시:재공백재체pEGFP-N1전염적Cos세포중형광포만정개세포,이재전염양성재체pEGFP-ZNF230화pEGFP-znf230적Cos세포중형광주요취집재세포핵중.표명전염적Cos세포계능고효표체인ZNF230화소서znf230단백,ZNF230기인표체적단백정위우세포핵내.
