遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2006年
1期
71-77
,共7页
陈伟%李山虎%于梅%王鸣刚%周建光
陳偉%李山虎%于梅%王鳴剛%週建光
진위%리산호%우매%왕명강%주건광
pBR322-Red%重组工程%基因敲入%霍乱毒素B亚单位
pBR322-Red%重組工程%基因敲入%霍亂毒素B亞單位
pBR322-Red%중조공정%기인고입%곽란독소B아단위
应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coli W3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6.荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达.为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1.证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中.结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达.
應用pBR322-Red介導的重組工程繫統,kan/sacB選擇反選擇繫統,雙鏈線性DNA重組技術和重疊引物介導的DNA重組技術,將長度為1 653 bp的luc報告基因分彆敲入到E.coli W3110染色體lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立瞭一繫列具有新遺傳錶型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6.熒光素酶分析錶明,外源報告基因luc能在這3箇結構基因處有效的組成型錶達.為瞭進一步確定外源基因的錶達情況,用霍亂毒素B亞單位基因ctxb替換瞭lacZ基因,構建瞭新菌株CWD1.證明瞭以單拷貝形式存在在大腸桿菌染色體CWD1上的ctxb基因能有效的錶達CTB蛋白併能將其分泌至細胞外培養液中.結果初步確定瞭大腸桿菌染色體上的lac操縱子結構基因位點適閤外源基因的敲入和錶達.
응용pBR322-Red개도적중조공정계통,kan/sacB선택반선택계통,쌍련선성DNA중조기술화중첩인물개도적DNA중조기술,장장도위1 653 bp적luc보고기인분별고입도E.coli W3110염색체lacZ,lacY화lacA기인적위치,건립료일계렬구유신유전표형적균주:CWL2、CWL4화CWL6.형광소매분석표명,외원보고기인luc능재저3개결구기인처유효적조성형표체.위료진일보학정외원기인적표체정황,용곽란독소B아단위기인ctxb체환료lacZ기인,구건료신균주CWD1.증명료이단고패형식존재재대장간균염색체CWD1상적ctxb기인능유효적표체CTB단백병능장기분비지세포외배양액중.결과초보학정료대장간균염색체상적lac조종자결구기인위점괄합외원기인적고입화표체.
