山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2007年
23期
10-12
,共3页
防御素%293T细胞%真核表达
防禦素%293T細胞%真覈錶達
방어소%293T세포%진핵표체
目的 克隆人α-防御素(α-HNP)基因,构建重组真核表达质粒pCG-HNP并检测其在293T细胞中的表达.方法 提取人PBMC细胞的RNA,以其为模板用RT-PCR技术克隆人α-HNP的cDNA,并将其插入质粒pCG中构建真核表达载体.测序证实后,将重组质粒用脂质体法转染293T细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western)检测目的蛋白分子的表达.结果 测序证实克隆的人α-HNP阅读框正确完整,PCR鉴定和酶切鉴定证实插入方向正确,免疫印迹结果显示重组质粒能够在293T细胞中表达HNP-GFP-Flag融合蛋白.结论 α-HNP基因成功克隆;其在293T细胞中的表达可为进一步研究其抗HIV活性奠定基础.
目的 剋隆人α-防禦素(α-HNP)基因,構建重組真覈錶達質粒pCG-HNP併檢測其在293T細胞中的錶達.方法 提取人PBMC細胞的RNA,以其為模闆用RT-PCR技術剋隆人α-HNP的cDNA,併將其插入質粒pCG中構建真覈錶達載體.測序證實後,將重組質粒用脂質體法轉染293T細胞,用蛋白質免疫印跡法(Western)檢測目的蛋白分子的錶達.結果 測序證實剋隆的人α-HNP閱讀框正確完整,PCR鑒定和酶切鑒定證實插入方嚮正確,免疫印跡結果顯示重組質粒能夠在293T細胞中錶達HNP-GFP-Flag融閤蛋白.結論 α-HNP基因成功剋隆;其在293T細胞中的錶達可為進一步研究其抗HIV活性奠定基礎.
목적 극륭인α-방어소(α-HNP)기인,구건중조진핵표체질립pCG-HNP병검측기재293T세포중적표체.방법 제취인PBMC세포적RNA,이기위모판용RT-PCR기술극륭인α-HNP적cDNA,병장기삽입질립pCG중구건진핵표체재체.측서증실후,장중조질립용지질체법전염293T세포,용단백질면역인적법(Western)검측목적단백분자적표체.결과 측서증실극륭적인α-HNP열독광정학완정,PCR감정화매절감정증실삽입방향정학,면역인적결과현시중조질립능구재293T세포중표체HNP-GFP-Flag융합단백.결론 α-HNP기인성공극륭;기재293T세포중적표체가위진일보연구기항HIV활성전정기출.
