CAJ | 학술논문

磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究.基于此,本研究采用18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记, 并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化.结果表明:在pH=4～5的KH2PO4缓冲体系中,37 ℃,标记反应持续19～24 h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-18O回标现象.建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中是有效的;最后与高准确度高灵敏度高分辨率的LTQ-FTICR质谱仪联用,建立了基于18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR的磷酸化蛋白质组定量技术.实验结果表明,该技术可以实现磷酸化肽段的有效定性和定量.本研究为磷酸化蛋白质组学定量研究提供了实用技术.
린산화단백질조학정량분석,요대린산화수식부집기술화정량기술진행연구.기우차,본연구채용18O은정동위소표기기술대이단백매매해태단혼합물진행표기, 병대기표기시간화표기후이단백매적변성조건진행우화.결과표명:재pH=4～5적KH2PO4완충체계중,37 ℃,표기반응지속19～24 h,제료C-단태지외,궤호소유적태단도가체도100%표기;채용TCEP가이유효지억제16O-18O회표현상.건립료여18O표기기술겸용성량호적IPG-IEF기술대린산화태단진행선택성부집,부집후공종HepG2세포중감정도491개린산화위점、362개린산화태단화356개린산화단백,표명IPG-IEF재대규모린산화태단분리부집중시유효적;최후여고준학도고령민도고분변솔적LTQ-FTICR질보의련용,건립료기우18O-IPG-IEF-LTQ-FTICR적린산화단백질조정량기술.실험결과표명,해기술가이실현린산화태단적유효정성화정량.본연구위린산화단백질조학정량연구제공료실용기술.