山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
18期
18-20
,共3页
RNA干扰%表皮生长因子受体%小干扰RNA%基因转染介质%肝癌细胞
RNA榦擾%錶皮生長因子受體%小榦擾RNA%基因轉染介質%肝癌細胞
RNA간우%표피생장인자수체%소간우RNA%기인전염개질%간암세포
目的 筛选介导表皮生长因子受体(EGFR)小干扰RNA( siRNA)转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件.方法 设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h.实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比.测算转染后细胞存活率及转染率.结果 Lipofectamine 2000、siPORT Amine及 combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%.2 μl的 combiMAGnetofection及200 nM的 EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高 (90%±1%),其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%.结论 介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2 μl的combiMAGnetofection、200 nM的 EGFR siRNA、转染72 h.
目的 篩選介導錶皮生長因子受體(EGFR)小榦擾RNA( siRNA)轉染肝癌HepG2細胞的試劑,併優化轉染條件.方法 設計靶嚮EGFR的特異性siRNA,分彆用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介導轉染肝癌HepG2細胞48、72 h.實時定量RT-PCR檢測HepG2細胞的EGFR mRNA,計算敲除EGFR mRNA率,據此篩選齣最佳轉染試劑,繼續進行不同試劑用量、不同siRNA濃度、正反嚮轉染的對比.測算轉染後細胞存活率及轉染率.結果 Lipofectamine 2000、siPORT Amine及 combiMAGnetofection介導轉染72 h後,HepG2細胞的EGFR mRNA敲除率均超過65%.2 μl的 combiMAGnetofection及200 nM的 EGFR siRNA組閤、72 h時HepG2細胞的EGFR mRNA沉默效率最高 (90%±1%),其細胞存活率為94%±8%,轉染率超過95%.結論 介導EGFR siRNA轉染HepG2細胞的最佳試劑是combiMAGnetofection,優化轉染條件為2 μl的combiMAGnetofection、200 nM的 EGFR siRNA、轉染72 h.
목적 사선개도표피생장인자수체(EGFR)소간우RNA( siRNA)전염간암HepG2세포적시제,병우화전염조건.방법 설계파향EGFR적특이성siRNA,분별용Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection개도전염간암HepG2세포48、72 h.실시정량RT-PCR검측HepG2세포적EGFR mRNA,계산고제EGFR mRNA솔,거차사선출최가전염시제,계속진행불동시제용량、불동siRNA농도、정반향전염적대비.측산전염후세포존활솔급전염솔.결과 Lipofectamine 2000、siPORT Amine급 combiMAGnetofection개도전염72 h후,HepG2세포적EGFR mRNA고제솔균초과65%.2 μl적 combiMAGnetofection급200 nM적 EGFR siRNA조합、72 h시HepG2세포적EGFR mRNA침묵효솔최고 (90%±1%),기세포존활솔위94%±8%,전염솔초과95%.결론 개도EGFR siRNA전염HepG2세포적최가시제시combiMAGnetofection,우화전염조건위2 μl적combiMAGnetofection、200 nM적 EGFR siRNA、전염72 h.
