山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
30期
14-16
,共3页
李常颖%李宏杰%张婷%畅继武
李常穎%李宏傑%張婷%暢繼武
리상영%리굉걸%장정%창계무
噬菌体抗体库%抗原结合片段%肿瘤坏死因子-α
噬菌體抗體庫%抗原結閤片段%腫瘤壞死因子-α
서균체항체고%항원결합편단%종류배사인자-α
目的 制备人源性抗肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白的可溶性Fab抗体.方法 用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况,ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性.结果 筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Westem blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体;ELISA筛选出的2株抗体(TA-04、TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应.结论 成功制备并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体.
目的 製備人源性抗腫瘤壞死因子(TNF)-α蛋白的可溶性Fab抗體.方法 用固相化的TNF-α蛋白從人天然Fab噬菌體抗體庫中篩選齣錶達抗TNF-α蛋白Fab抗體的暘性剋隆,經酶切及連接反應構建可溶性錶達噬菌粒併轉化至大腸桿菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性錶達,SDS-PAGE及Western blot分析鑒定抗體錶達情況,ELISA鑒定其抗原結閤活性和特異性.結果 篩選併錶達瞭人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗體,在非還原SDS-PAGE中形成相對分子質量47 kD的條帶;Westem blot分析證實錶達的蛋白即Fab抗體;ELISA篩選齣的2株抗體(TA-04、TA-13)具有良好的抗原特異性和抗原結閤活性,與小牛血清白蛋白無交扠反應.結論 成功製備併鑒定瞭人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗體.
목적 제비인원성항종류배사인자(TNF)-α단백적가용성Fab항체.방법 용고상화적TNF-α단백종인천연Fab서균체항체고중사선출표체항TNF-α단백Fab항체적양성극륭,경매절급련접반응구건가용성표체서균립병전화지대장간균BL21(DE3)pLysS중,IPTG고효가용성표체,SDS-PAGE급Western blot분석감정항체표체정황,ELISA감정기항원결합활성화특이성.결과 사선병표체료인원성항TNF-α단백적Fab항체,재비환원SDS-PAGE중형성상대분자질량47 kD적조대;Westem blot분석증실표체적단백즉Fab항체;ELISA사선출적2주항체(TA-04、TA-13)구유량호적항원특이성화항원결합활성,여소우혈청백단백무교차반응.결론 성공제비병감정료인원성항TNF-α단백적가용성Fab항체.
