单纯性先天性心脏病中TBX5基因表达异常的机制
단순성선천성심장병중TBX5기인표체이상적궤제
The mechanism of TBX5 abnormal expression in simple congenital heart disease
  • 万方数据
    遗传 유전
    HEREDITAS(BEIJING)
    2009年 4期 374-380 ,共7页

    辛娜%邱广蓉%宫立国%徐小延%孙开来

    신나%구엄용%궁입국%서소연%손개래

    先天性心脏病%TBX5%NKX2-5 先天性心髒病%TBX5%NKX2-5
    선천성심장병%TBX5%NKX2-5
    为探讨人类单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因表达下调的可能原因,应用变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测100例单纯性先天性心脏病患者中TBX5基因上游1200 bp调控区的突变情况;应用甲基化敏感性限制性内切酶(MS-RE)法检测50例单纯性先天性心脏病患者和5例非先天性心脏病患者心肌组织TBX5基因启动子区两个CpG岛(转录起始点上游-49-188 bp和-247-464 bp处)的甲基化情况;应用P-match软件预测小鼠Tbx5基因上游转录因子Nkx2-5的结合位点,构建Nkx2-5表达载体转染小鼠H9C2(2-1)心肌细胞,RT-PCR及Western blotting检测Tbx5基因表达,凝胶阻滞实验(EMSA)验证Nkx2-5和Tbx5基因的作用.结果在100例单纯性先天性心脏病患者中,未检测到TBX5基因上游1 200 bp调控区突变;非先天性心脏病患者和单纯性先天性心脏病患者在两个CpG岛存在相同的甲基化;小鼠Tbx5基因转录起始点上游-312-315 bp可能存在Nkx2-5的结合位点,转染Nkx2-5表达载体后Tbx5基因在mRNA及蛋白质水平均有表达增高趋势,Nkx2-5在体外可以与Tbx5基因上游-312-315 bp序列相结合,以上结果提示TBX5基因调控区突变和两个CpG岛的甲基化不是单纯性先天性心脏病患者心肌组织中TBX5基因表达下调的原因,TBX5基因表达下调可能由于NKX2-5的表达异常引起.
    위탐토인류단순성선천성심장병환자중TBX5기인표체하조적가능원인,응용변성고효액상색보(DHPLC)방법검측100례단순성선천성심장병환자중TBX5기인상유1200 bp조공구적돌변정황;응용갑기화민감성한제성내절매(MS-RE)법검측50례단순성선천성심장병환자화5례비선천성심장병환자심기조직TBX5기인계동자구량개CpG도(전록기시점상유-49-188 bp화-247-464 bp처)적갑기화정황;응용P-match연건예측소서Tbx5기인상유전록인자Nkx2-5적결합위점,구건Nkx2-5표체재체전염소서H9C2(2-1)심기세포,RT-PCR급Western blotting검측Tbx5기인표체,응효조체실험(EMSA)험증Nkx2-5화Tbx5기인적작용.결과재100례단순성선천성심장병환자중,미검측도TBX5기인상유1 200 bp조공구돌변;비선천성심장병환자화단순성선천성심장병환자재량개CpG도존재상동적갑기화;소서Tbx5기인전록기시점상유-312-315 bp가능존재Nkx2-5적결합위점,전염Nkx2-5표체재체후Tbx5기인재mRNA급단백질수평균유표체증고추세,Nkx2-5재체외가이여Tbx5기인상유-312-315 bp서렬상결합,이상결과제시TBX5기인조공구돌변화량개CpG도적갑기화불시단순성선천성심장병환자심기조직중TBX5기인표체하조적원인,TBX5기인표체하조가능유우NKX2-5적표체이상인기.
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