现代医药卫生
現代醫藥衛生
현대의약위생
MODERN MEDICINE HEALTH
2011年
13期
1924-1927
,共4页
彭韦霞%文芳%曹仁贤%杨慧龄%颜斌%张友其
彭韋霞%文芳%曹仁賢%楊慧齡%顏斌%張友其
팽위하%문방%조인현%양혜령%안빈%장우기
Caveolin-1%人脐静脉内皮细胞%siRNA%慢病毒表达系统
Caveolin-1%人臍靜脈內皮細胞%siRNA%慢病毒錶達繫統
Caveolin-1%인제정맥내피세포%siRNA%만병독표체계통
目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Caveolin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用.方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链.通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PollII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体.用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率.结果:测序结果显示pENTRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确.LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统.转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%.结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应.人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础.
目的:利用小榦擾RNA(siRNA)技術建立人臍靜脈內皮細胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,為研究Caveolin-1基因在人臍靜脈內皮細胞中的作用.方法:通過Ambion專用軟件對Caveolin-1基因編碼區分析,設計閤成短髮夾RNA(shRNA)單鏈.通過T4連接酶將退火反應閤成的shRNA雙鏈剋隆入含RNA PollII聚閤酶錶達元件的pENTRTM/U6入門載體,併利用Gateway技術構建相應的慢病毒RNA榦擾(RNAi)錶達載體.用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印跡法分析沉默效率.結果:測序結果顯示pENTRTM/U6載體插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及閱讀框架正確.LR重組反應後成功構建瞭針對Caveolin-1基因的RNAi慢病毒錶達繫統.轉染ECV-304細胞穫得對Caveolin-1的沉默效率大于85%.結論:成功地構建瞭針對Caveolin-1基因的RNAi慢病毒錶達繫統,穫得瞭長期穩定的基因剔除效應.人臍靜脈內皮細胞Caveolin-1基因沉默模型能長期保種及傳代,為進一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定瞭基礎.
목적:이용소간우RNA(siRNA)기술건립인제정맥내피세포(ECV304)소요단백(Caveolin-1)기인침묵모형,위연구Caveolin-1기인재인제정맥내피세포중적작용.방법:통과Ambion전용연건대Caveolin-1기인편마구분석,설계합성단발협RNA(shRNA)단련.통과T4련접매장퇴화반응합성적shRNA쌍련극륭입함RNA PollII취합매표체원건적pENTRTM/U6입문재체,병이용Gateway기술구건상응적만병독RNA간우(RNAi)표체재체.용REAL-TIME RT-PCR、단백인적법분석침묵효솔.결과:측서결과현시pENTRTM/U6재체삽입적Cavelin-1기인shRNA서렬대소급열독광가정학.LR중조반응후성공구건료침대Caveolin-1기인적RNAi만병독표체계통.전염ECV-304세포획득대Caveolin-1적침묵효솔대우85%.결론:성공지구건료침대Caveolin-1기인적RNAi만병독표체계통,획득료장기은정적기인척제효응.인제정맥내피세포Caveolin-1기인침묵모형능장기보충급전대,위진일보연구Cav-eolin-1기인적공능전정료기출.
